Transgenic Mouse Methods and Protocols pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:Humana Pr Inc

作者:Hofker, Marten H. 编

出品人:

页数:400

译者:

出版时间:2002-8

价格:$ 118.09

装帧:HRD

isbn号码:9780896039155

丛书系列:

图书标签:

• 转基因小鼠
• 小鼠模型
• 基因工程
• 生物技术
• 实验方法
• 分子生物学
• 动物模型
• 基因敲入
• 基因敲除
• 生物医学研究

现代生物技术前沿：基因编辑与蛋白质工程实践指南 图书名称：《现代生物技术前沿：基因编辑与蛋白质工程实践指南》 内容简介 在生命科学的浪潮中，基因编辑技术和蛋白质工程以前所未有的速度和精度，正在重塑我们对生命过程的理解，并开辟出全新的疾病治疗和生物制造路径。本书旨在为生命科学研究人员、生物技术工程师以及高年级本科生和研究生提供一个全面、深入且极具操作性的实践指南，聚焦于当前最尖端、应用最广泛的基因修饰技术和蛋白质结构功能改造方法。 本书结构清晰，内容涵盖了从理论基础到实验室操作、数据分析的全过程，确保读者能够掌握从设计到验证的每一个关键环节。 第一部分：基因组编辑的精深掌握——CRISPR/Cas系统的高级应用 本部分深入探讨了当前基因组编辑领域的核心技术——CRISPR-Cas系统，并超越了基础的基因敲除应用，侧重于其在复杂生物体系中的精准调控。 第一章：CRISPR-Cas9系统的最新迭代与优化 详细介绍了CRISPR-Cas9系统的基本原理、不同Cas酶的特性对比（如Cas12a、Cas13），以及如何应对脱靶效应。重点阐述了新型核酸酶（如Base Editing和Prime Editing）的结构原理、设计策略及其在单碱基精确修正和复杂插入/缺失构建中的优势。涵盖了sgRNA的设计算法和验证流程，包括在线工具的使用和离体测试方法。 第二章：靶向调控与表观遗传学修饰 本章聚焦于不切割DNA的CRISPR工具——“失活型”Cas9（dCas9）的工程化应用。详细描述了如何将dCas9与转录激活域（CRISPRa）或转录抑制域（CRISPRi）融合，以实现对内源基因的非破坏性、可逆性调控。探讨了dCas9与表观遗传修饰酶（如DNA甲基转移酶、组蛋白去乙酰化酶）的融合体，如何用于研究基因表达的动态变化和染色质重塑机制。 第三章：复杂基因组编辑的挑战与解决方案 探讨在哺乳动物细胞系、原代细胞以及模式生物（如斑马鱼、小鼠胚胎干细胞）中进行高效、可预测的基因编辑的特殊考量。内容包括： 同源重组修复（HDR）的效率提升： 针对性地介绍了细胞周期同步化、DNA损伤通路调控以及载体设计策略，以最大化HDR的成功率。 体内递送系统： 详细对比了腺相关病毒（AAV）、慢病毒（LV）以及新型脂质纳米颗粒（LNP）在将CRISPR组分递送到特定组织或器官中的递送效率、免疫原性和安全性考量。 第二部分：蛋白质工程与结构生物学导论 本部分将研究重点转向蛋白质层面，探讨如何基于理性设计和定向进化，改造蛋白质的功能、稳定性或催化活性，这是生物制药和工业酶开发的核心技术。 第四章：蛋白质结构预测与功能注释 本章介绍了蛋白质结构生物学的基础工具箱。内容包括：从氨基酸序列预测三维结构的软件（如AlphaFold2的原理与应用），以及结合同源建模、穿线法（threading）进行结构解析的实践步骤。深入讨论了如何利用生物信息学方法预测关键功能域、结合位点以及潜在的免疫原性表位。 第五章：理性设计与定向进化策略 这是蛋白质工程的核心。详细介绍了理性设计（Rational Design）中基于分子动力学模拟和自由能计算来预测氨基酸替换效应的方法。在定向进化方面，详细阐述了： 高通量筛选技术： 包括噬菌体展示、酵母展示和核糖体展示的原理、文库构建方法（如定点突变、随机诱变）及其在筛选高亲和力配体或高活性酶中的应用流程。 酶促反应动力学分析： 介绍如何通过米氏方程分析和层析技术，定量评估突变体对催化效率（$k_{cat}/K_m$）的影响。 第六章：抗体工程与生物偶联技术 聚焦于蛋白质工程在生物制药领域的关键应用——单克隆抗体的优化。内容包括： 人源化与亲和力成熟： 如何通过CDR（互补决定区）的扫描突变，提高抗体与靶点的结合亲和力，并降低免疫原性。 抗体偶联药物（ADC）的构建： 详细讲解连接子（Linker）的选择标准、偶联位点（如赖氨酸残基、半胱氨酸残基）的位点特异性修饰技术，以及如何通过偶联率（DAR）控制药物有效性。 第三部分：实验验证与质量控制 任何先进的技术都需要严格的验证流程来确认其有效性和安全性。本部分提供了一套完整的下游分析和验证方案。 第七章：基因编辑效率的精确量化 介绍用于检测基因编辑事件的敏感方法： 高分辨率熔解曲线分析（HRM）： 用于初步筛查基因组修饰。 Sanger测序与深度测序（NGS）： 利用Illumina平台进行嵌合体分析，量化不同修复路径的比例，包括Indel的频率和HDR的成功率。 T7 Endonuclease I/ SURVEYOR 酶法： 快速判断双链断裂的发生频率。 第八章：功能性蛋白质的表征与纯化 探讨如何从复杂的生物体系中获得高质量的工程化蛋白质： 重组蛋白的表达系统选择： 大肠杆菌、昆虫细胞（Baculovirus）和哺乳动物细胞系统在翻译后修饰和产量上的权衡。 高效纯化策略： 亲和层析（如His-tag, GST-tag）与离子交换/疏水作用层析的串联应用，确保蛋白质纯度和活性。 结构活性验证： 使用ELISA、表面等离子共振（SPR）或生物层干涉（BLI）技术，精确测量工程化蛋白质的结合动力学参数。 结语：面向未来的整合研究 全书最后总结了基因编辑与蛋白质工程的交叉前沿，展望了利用多组学数据指导CRISPR设计、以及利用AI驱动的蛋白质设计平台加速药物开发的新趋势。本书致力于成为实验室中不可或缺的工具书，指导研究人员高效地将前沿理论转化为可靠的实验成果。

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我一直认为，严谨的实验方法和可重复的协议是科学研究的基石。 《Transgenic Mouse Methods and Protocols》的命名就直接点出了其核心价值：为转基因小鼠的构建提供一套完整、可靠的操作流程。书中可能详细介绍了从起始材料的准备，到各个关键步骤的操作细节，再到最终的验证和保存，每一个环节都将经过周密的考量。我特别期待书中能够包含一些关于“基因编辑技术在转基因小鼠中的应用”的最新进展，比如CRISPR/Cas9系统的优化和在不同细胞系中的应用效果，以及相关的伦理考量和实验设计原则。同时，书中关于“转基因小鼠模型的标准化和资源共享”的讨论，也可能为我提供一些关于如何更好地管理和利用我所构建的转基因品系的有益启示。我希望这本书能够成为我实验室的必备参考手册，让每一次的转基因小鼠构建实验都能够达到预期的效果，并为科学研究提供高质量的工具。

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这本书简直是为我量身定做的！我一直对转基因小鼠技术充满好奇，但苦于没有一个系统性的学习途径。偶然间翻到了《Transgenic Mouse Methods and Protocols》，立刻被它详实的目录吸引住了。从最基础的显微注射技术，到更复杂的基因编辑策略，这本书几乎涵盖了所有我关心的方面。每一章的标题都让我跃跃欲试，比如“CRISPR/Cas9在小鼠基因工程中的应用”、“转基因小鼠模型的建立与验证”等等，这些都是当前研究领域最热门、最核心的技术。我尤其期待书中关于“多基因修饰策略”的部分，这对于构建复杂的疾病模型至关重要。而且，这本书不仅仅停留在理论介绍，从名字里的“Methods and Protocols”就能看出，它一定会提供详尽的操作步骤和实验设计思路，这对于初学者来说简直是福音。我迫不及待地想深入研究其中每一个细节，学习如何精确地引入或敲除特定基因，如何构建能够模拟人类疾病的动物模型。相信这本书能让我迅速掌握这项关键技术，为我未来的科研工作打下坚实的基础。

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作为一个经验丰富的分子生物学研究者，我一直在寻找能够拓宽研究思路、提升实验效率的资源。 《Transgenic Mouse Methods and Protocols》这本书的出现，无疑为我带来了新的灵感。《Transgenic Mouse Methods and Protocols》的标题本身就暗示了其内容的深度和广度。书中对各种转基因小鼠构建策略的详细阐述，特别是关于不同递送系统（如病毒载体、电穿孔等）的比较分析，以及针对不同研究目的（如基因功能研究、疾病模型建立、药物筛选等）的选择建议，都给我留下了深刻的印象。我特别关注书中关于“表观遗传学修饰在转基因小鼠中的应用”以及“条件性基因敲除/敲入策略”的章节，这些都是当前生命科学前沿的重要课题，书中提供的成熟方案和潜在挑战的分析，能够帮助我更好地设计和执行我的实验。此外，我期待书中能够包含大量的案例研究和图示，能够直观地展示实验过程和结果，从而帮助我更有效地理解和掌握复杂的实验技术。

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《Transgenic Mouse Methods and Protocols》这本书，在我看来，代表了现代生物技术研究的深度与前沿。我特别关注书中对“非整合性转基因技术”和“基因表达调控网络构建”的探讨，这能为我提供全新的研究视角。我预想书中会详细解析各种非整合性转基因递送载体的优缺点，以及如何在转基因表达水平上实现更精细的调控，这对于研究瞬时基因功能或在特定时间窗口观察基因效应具有重要意义。此外，关于如何利用转基因小鼠模拟复杂的人类疾病，书中可能还会涉及到多基因共表达、基因剂量效应以及疾病模型的验证标准等方面的内容。这无疑能极大地启发我在设计复杂疾病模型时，如何更有效地整合多种技术手段。我期待书中能够提供一些关于“新兴转基因技术趋势”的展望，让我能够提前了解未来几年可能出现的突破性进展，并据此调整我的研究方向。

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对于我这样一个刚刚踏入实验室，对转基因小鼠技术感到既兴奋又有些畏惧的新手来说，《Transgenic Mouse Methods and Protocols》简直像一位耐心细致的导师。我最想从这本书中了解的是，如何从零开始，一步步地构建自己的转基因小鼠品系。书中关于“小鼠早期胚胎操作技术”的介绍，比如如何进行显微注射、如何诱导基因整合等，一定是非常宝贵的教学材料。我担心在实验过程中会出现各种预料之外的问题，比如胚胎死亡率过高、转基因效率低下等，所以我非常期待书中能够提供详细的故障排除指南和优化建议，帮助我避免走弯路。此外，关于“转基因小鼠的鉴定和表型分析”的内容也让我非常感兴趣，了解如何准确地确认转基因是否成功插入，以及如何通过观察小鼠的生理和行为变化来评估基因的功能，这些都是至关重要的技能。我相信有了这本书的指导，我能够更有信心地投入到这项工作中。

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