Human Molecular Biology Laboratory Manual pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:Blackwell Pub

作者:Surzycki, Stefan

出品人:

页数:248

译者:

出版时间:2003-2

价格:723.00元

装帧:Pap

isbn号码:9780632046768

丛书系列:

图书标签:

• 分子生物学
• 人类分子生物学
• 实验指导
• 实验室手册
• 生物技术
• 基因
• DNA
• RNA
• 蛋白质
• 生物医学

分子生物学前沿技术与实践：一本深入探索生命奥秘的实验指南 本书面向所有对分子生物学充满热情的学生、研究人员和技术人员。它旨在提供一个全面、深入且高度实用的实验平台，使读者能够掌握从基础到尖端的一系列核心分子生物学技术，并理解其背后的生物学原理。 在当今生命科学研究领域，分子生物学已不再是一个孤立的学科，而是渗透到生物学、医学、生物技术乃至环境科学等多个领域的基石。对实验技能的精湛掌握，是连接理论认知与实际发现的唯一桥梁。本书摒弃了那些专注于特定、狭窄应用的手册模式，转而采用一种更具前瞻性和适应性的视角，侧重于构建一个通用且强大的分子生物学实验知识体系。 本书的结构设计，充分考虑了现代生物学实验室的实际需求和发展趋势。我们致力于提供方法学的深度解析，而非仅仅是操作步骤的罗列。每一个章节都围绕一个核心的生物学问题展开，并详细阐述为解决该问题所需的技术路线图。 第一部分：分子操作的基石——核酸的提取、纯化与定量 这一部分是所有分子生物学实验的起点。我们认为，实验的成功与否，很大程度上取决于起始材料的质量。因此，本书花费了大量篇幅，详细探讨了核酸（DNA和RNA）从复杂生物基质中分离纯化的艺术与科学。 组织与细胞裂解策略的优化： 涵盖了从坚韧的植物组织、冷冻保存的动物组织到培养细胞系等不同样本类型的裂解缓冲液配方、酶解条件和物理破坏方法（如研磨、超声波）。特别强调了如何选择合适的蛋白酶K和RNase抑制剂组合，以最大化目标分子的得率并最小化降解。 高效纯化流程的对比分析： 详细比较了经典的有机溶剂提取法（酚-氯仿）、基于硅胶膜的柱层析法（Spin Column Technology）的机制，以及新兴的磁珠分离技术在不同规模（从微量到大规模制备）中的适用性、效率和纯度影响。 精确的定量与质量评估： 不仅仅停留在使用分光光度计（NanoDrop）读取A260/A280比值，更深入讲解了如何使用荧光定量试剂盒（如Qubit）进行更高灵敏度和特异性的DNA/RNA浓度测定。同时，对电泳和毛细管电泳（CE）在评估核酸完整性（RNA Integrity Number, RIN值）上的应用进行了深入探讨，帮助读者建立对“好”模板的直观认识。 第二部分：基因操作的核心技术——重组DNA技术的新视野 重组DNA技术是现代生物技术的核心驱动力。本书不再局限于克隆载体的传统介绍，而是聚焦于高通量、高效率的基因编辑和构建策略。 限制性内切酶的酶切动力学与选择： 探讨了酶切反应的最佳条件（温度、盐浓度、时间），以及如何设计多酶切方案以避免副反应（如粘性末端重连的偏好性）。我们提供了常见限制性内切酶的切割模式图谱和应用指南。 现代克隆策略的深入解析： 详细介绍了Gibson Assembly（一剪接组装）和Golden Gate Assembly（Type IIS内切酶介导的无缝克隆）等无缝克隆技术的原理、引物设计要求和实验流程优化，使其能胜任复杂基因盒的快速构建。 载体构建的多样性与选择： 对原核表达载体（如pET系统）、真核表达载体（慢病毒、腺病毒载体）以及单杂交/双杂交筛选载体的结构特点、启动子选择和下游应用潜力进行了系统性的比较。 第三部分：扩增、检测与差异表达分析 本部分是理解基因调控和病理机制的关键。我们侧重于如何设计出可靠的、可重复的扩增和检测实验。 聚合酶链式反应（PCR）的进阶技巧： 不仅涵盖了标准PCR，更详细阐述了实时荧光定量PCR（qPCR）的引物设计原则（Tm值、二级结构、二聚体抑制），溶解曲线分析，以及绝对定量和相对定量（ΔΔCt法）的统计学基础。对热启动酶的选择和污染控制进行了强调。 高分辨率的DNA测序技术： 在深入讲解Sanger测序的原理后，本书将重点放在新一代测序技术（NGS）的文库制备流程概述上，包括Illumina平台的基础化学反应，以及如何评估文库质量以确保下游测序数据的可靠性。 蛋白质的分子可视化技术： 涵盖了SDS-PAGE的精确胶体配制、样品准备（还原与非还原条件），以及Western Blotting中信号增强技术（如化学发光与荧光检测的对比）和膜分离（PVDF与NC膜）的选择标准。 第四部分：蛋白质的制备、纯化与功能分析 蛋白质是执行生命功能的主要分子，对其进行稳定、纯净地制备是功能研究的前提。 重组蛋白的表达优化： 探讨了在大肠杆菌、酵母和哺乳动物细胞中表达目标蛋白的策略。重点分析了共表达伴侣分子（Chaperones）对难溶性蛋白折叠的影响，以及诱导剂（如IPTG, TSA）浓度对表达水平和可溶性的精细调控。 层析技术在纯化中的应用： 详尽解析了亲和层析（Affinity Chromatography），如His-tag的镍柱层析（IMAC）的操作细节，包括洗脱梯度和去标签化酶切的最佳时机。同时，对比了离子交换层析和分子筛层析在去除杂蛋白和分离不同分子量蛋白时的策略。 蛋白质活性与相互作用的检测： 介绍酶动力学测定的基础（米氏方程的实际应用），以及如何使用表面等离子共振（SPR）或生物层干涉（BLI）技术进行高精度的生物分子相互作用分析（如Kd值的测定）。 结语：数据整合与实验设计哲学 本书的最后部分，将读者的视角从单一技术提升到整体实验设计的层面。我们强调了阴性对照、阳性对照和样本重复在分子生物学实验中的绝对重要性。如何根据已有的数据建立一个可信的假设检验模型，如何进行数据可视化以清晰地传达结果，以及如何在新一代组学数据（如转录组、蛋白质组数据）的指导下，设计下一轮精准的分子验证实验，是本书留给读者的最后思考框架。 本书并非一个速查手册，而是一部需要读者亲身实践、反复研读的科学探索工具箱。通过掌握这些核心技术的深度机制和优化方法，您将能够自信地应对未来分子生物学领域中出现的任何新的技术挑战。

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