The Proteomics Protocols Handbook

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出版者:Humana Pr Inc
作者:Walker, John M.
出品人:
页数:1016
译者:
出版时间:2005-3
价格:$ 224.87
装帧:Pap
isbn号码:9781588295934
丛书系列:
图书标签:
  • Proteomics
  • Protein Analysis
  • Mass Spectrometry
  • Protein Identification
  • Quantitative Proteomics
  • Proteome Analysis
  • Biotechnology
  • Molecular Biology
  • Life Sciences
  • Laboratory Protocols
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具体描述

Hands-on researchers describe in step-by-step detail 73 proven laboratory methods and bioinformatics tools essential for analysis of the proteome. These cutting-edge techniques address such important tasks as sample preparation, 2D-PAGE, gel staining, mass spectrometry, and post-translational modification. There are also readily reproducible methods for protein expression profiling, identifying protein-protein interactions, and protein chip technology, as well as a range of newly developed methodologies for determining the structure and function of a protein. The bioinformatics tools include those for analyzing 2D-GEL patterns, protein modeling, and protein identification. All laboratory-based protocols follow the successful Methods in Molecular Biology(t) series format, each offering step-by-step laboratory instructions, an introduction outlining the principle behind the technique, lists of the necessary equipment and reagents, and tips on troubleshooting and avoiding known pitfalls.

现代生物技术前沿:蛋白质组学深度解析与实验策略 本书籍: 现代生物技术前沿:蛋白质组学深度解析与实验策略(暂定名) 图书简介: 本手册旨在为生命科学、生物化学、分子生物学及生物信息学领域的研究人员、高级学生及技术人员提供一套全面、深入且高度实用的蛋白质组学研究指南。我们深知,在当前生命科学探索的浪潮中,蛋白质作为生命活动的执行者,其动态变化和相互作用网络的解析是理解疾病机理、开发新型生物标志物和靶向药物的关键。本书超越了基础的理论介绍,着重于构建一个完整且可操作的实验框架,覆盖从样品制备到数据解释的每一个关键环节。 第一部分:蛋白质组学基础与研究设计 本部分奠定了蛋白质组学研究的理论基石,并强调了严谨的研究设计在获取可靠、可重复数据中的决定性作用。 第一章:蛋白质组学的时代意义与挑战 本章详细阐述了蛋白质组学(Proteomics)在后基因组时代的核心地位。基因组学提供了“蓝图”,而蛋白质组学则揭示了实际执行功能的分子机器的实时状态。我们将探讨蛋白质表达、翻译后修饰(PTMs)以及蛋白质-蛋白质相互作用(PPIs)在细胞信号转导、代谢调控和生理病理过程中的决定性作用。同时,本章也直面当前蛋白质组学面临的挑战:蛋白质的巨大动态范围、PTMs的复杂性、以及样品异质性带来的技术瓶颈。 第二章:高质量样品制备的艺术与科学 蛋白质组学实验的成败,百分之七十取决于样品制备的质量。本章将详尽剖析从不同生物源(细胞培养物、新鲜/冷冻组织、体液等)提取全蛋白的优化方案。我们将深入探讨裂解缓冲液的配方选择,重点关注蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的精确配比,以最大限度地保留蛋白质的天然状态和PTM信息。此外,针对低丰度蛋白质和膜蛋白的富集技术,如密度梯度离心、超滤和特异性亲和层析(如用于磷酸化蛋白的TiO2或IMAC),将提供详细的操作步骤和故障排除指南。 第三部分:核心分离与分析技术 本部分是全书的技术核心,聚焦于高分辨率的分离技术和先进的质谱(MS)联用技术。 第三章:二维电泳(2-DE)的精细操作与优化 尽管质谱技术日益成熟,二维电泳依然是分离复杂蛋白混合物、进行差异表达分析的有力工具。本章将详细介绍等电聚焦(IEF)的优化,包括IPG胶条的选择、载样量的控制、以及针对不同等电点范围的聚焦程序。第二维度的SDS-PAGE,将着重讲解胶体质量对分辨率的影响,并提供适用于不同分子量范围的胶体配方。此外,我们将介绍如何将2-DE图像与质谱鉴定流程无缝对接。 第四章:液相色谱技术在蛋白质组学中的应用 液相色谱是现代蛋白质组学数据获取的关键前置步骤。本章将深入探讨反相高效液相色谱(RP-HPLC)和亲水作用色谱(HILIC)在肽段和蛋白质分离中的应用。特别关注高效的“在线”色谱系统(如nanoLC),及其与高分辨质谱仪的耦合技术。内容将涵盖流动相的优化、梯度设计的策略,以及如何选择合适的色谱柱以应对高复杂度的生物样品。 第五章:高分辨质谱技术:工作流程与仪器原理 本章侧重于当前主流质谱仪器的性能指标和操作模式。我们将对比四极杆、Orbitrap、飞行时间(TOF)等技术在蛋白质组学中的优势与局限。详细解析“自上而下”(Top-Down)和“自下而上”(Bottom-Up)策略的实验设计,并重点讲解数据依赖采集(DDA)和数据非依赖采集(DIA)模式在定量分析中的机制差异、优缺点及适用场景。 第四章:翻译后修饰(PTMs)的特异性分析 PTMs是理解蛋白质功能的关键。本章将专门介绍如何靶向性地富集和鉴定主要的PTMs,包括磷酸化、糖基化、泛素化和乙酰化。针对磷酸化蛋白质组学,我们将详细阐述亲和试剂的选择、富集条件的优化,以及如何利用高能碰撞解离(HCD)或电子转移解离(ETD)来确定修饰位点。 第五部分:数据解析与生物信息学整合 蛋白质组学产生了海量的复杂数据,有效的生物信息学处理是将其转化为生物学见解的桥梁。 第六章:肽段数据库检索与鉴定算法 本章深入讲解肽段碎片离子与理论谱图的匹配过程。我们将详细剖析主流的数据库搜索软件(如Mascot, Sequest, MaxQuant等)的算法原理,包括如何设置合理的参数(如选择性、容错率、酶切规则)。重点阐述“假阳性率控制”(FDR)的计算方法,以及如何基于经验值模型(如Refinement Scores)提高鉴定的置信度。 第七章:定量蛋白质组学:从标记到分析 定量分析是比较不同条件下蛋白质表达水平变化的核心。本章将全面介绍标记方法,包括有标记(如TMT, iTRAQ)和无标记(如Label-Free Quantification, LFQ)技术。详细解释TMT标记的步骤、质量控制(QC)以及同源离子的干扰校正。对于LFQ,我们将解析基于离子丰度和基于谱计数(Spectral Counting)的定量策略及其统计学稳健性。 第八章:网络构建与功能富集分析 原始的蛋白质鉴定和定量列表需要通过生物信息学工具转化为可解释的生物学信号。本章将指导读者使用GO(Gene Ontology)和KEGG通路分析工具,进行功能富集度检验。同时,重点讲解如何利用PPI数据库(如STRING)构建相互作用网络,并识别网络中的关键节点蛋白和调控模块,从而揭示系统生物学层面的变化。 第九章:质量控制与数据标准化 任何高通量实验都离不开严格的质量控制。本章提供了贯穿实验全程的QC指标清单:从原始LC-MS数据的信噪比、扫描深度,到肽段识别的分布图,再到定量数据的批次效应分析。本章还提供了一套数据标准化流程,确保不同批次、不同仪器采集的数据能够进行可靠的跨实验比较。 结语:蛋白质组学研究的未来方向 本章展望了蛋白质组学技术的前沿进展,包括单细胞蛋白质组学、空间蛋白质组学(Spatial Proteomics)的发展及其在组织病理学中的应用潜力。强调跨学科合作与人工智能在加速数据解析中的角色,激励读者将所学知识应用于解决重大的生物医学难题。 本书的结构设计力求逻辑严密,从基础概念层层递进到复杂的技术应用与数据解析,每一章节都配有详尽的实验流程图和关键参数设定建议,旨在成为蛋白质组学研究者案边不可或缺的实用参考工具书。

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用户评价

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我是一名在临床研究领域工作的研究员,我的工作重点是寻找能够早期诊断和预测疾病预后的生物标志物。蛋白质组学技术,尤其是液相蛋白质组学,为我们提供了巨大的潜力来发现新的生物标志物。《蛋白质组学实验手册》这本书,可以说是为我打开了一个全新的世界。它不仅仅是一本技术手册,更是一本充满了创新思想和实践经验的宝库。我尤其喜欢书中关于临床样本处理和分析的章节。书中详细介绍了如何从血液、尿液、组织等不同类型的临床样本中提取和纯化蛋白质,以及在处理这些样本时需要注意的特殊问题,比如样本的稳定性、污染的控制以及如何避免假阳性结果的产生。这对于我们临床研究的质量控制至关重要。而且,书中还深入探讨了如何利用蛋白质组学数据来鉴定和验证生物标志物,包括如何设计合理的对照组,如何进行差异表达分析,以及如何利用机器学习等方法来构建预测模型。这些内容直接解决了我们在生物标志物发现过程中遇到的挑战。书中还提供了许多实际的案例研究,展示了蛋白质组学技术在不同疾病领域的应用,比如癌症、神经系统疾病和心血管疾病等。这些案例让我深受启发,也为我今后的研究方向提供了更多的思路。这本书的严谨性和实用性让我印象深刻,它为我深入开展临床蛋白质组学研究提供了坚实的基础和可靠的指导。

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我是一名生物信息学博士后,主要研究方向是利用计算方法来分析蛋白质相互作用网络,以及挖掘蛋白质在疾病发生发展中的作用。在我的研究中,蛋白质组学数据扮演着至关重要的角色,它们是我们构建模型和验证假设的基石。在接触《蛋白质组学实验手册》之前,我对实际的蛋白质组学实验操作了解得并不深入,很多时候只是停留在理论层面。这本书彻底改变了我的认知。它为我提供了一个非常完整的视角,让我能够理解蛋白质组学实验的每一个环节是如何进行的,以及这些实验参数是如何影响最终的数据质量的。书中对于质谱技术(如LC-MS/MS)的原理讲解非常透彻,包括不同 ionization source(如ESI, MALDI)的特点,以及不同 mass analyzer(如Orbitrap, TOF)的性能差异。这对我理解质谱数据的产生过程,以及如何更有效地进行数据预处理和质控非常有帮助。更重要的是,书中关于数据处理和分析的部分,提供了非常详尽的算法介绍和软件推荐。它详细解释了如何从原始的质谱文件中提取肽段信息,如何进行数据库搜索,如何进行定量分析,以及如何进行下游的生物信息学分析。这些内容直接解决了我在实际工作中遇到的瓶颈,让我能够更好地理解和利用我所获取的蛋白质组学数据。通过阅读这本书,我不仅能够更好地与进行实验的同事沟通,还能更准确地评估实验结果的可靠性,并设计出更具科学意义的计算分析方案。这本书为我架起了实验科学与计算科学之间的桥梁。

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我是一名刚毕业不久的硕士研究生,现在在一家具备完善蛋白质组学平台的研究所工作。在我的硕士课题中,我接触了初步的蛋白质组学实验,但感觉很多理论知识和实际操作之间存在鸿沟。这本《蛋白质组学实验手册》可以说是帮了我大忙。它以一种非常贴近实际操作的方式,详细讲解了每一个实验步骤,以及背后的原理。我最喜欢的是书里关于质谱仪操作和数据处理的章节。书中详细介绍了不同类型的质谱仪,以及如何进行仪器的日常维护和校准,这对于我来说是至关重要的。而且,书中关于数据处理的章节,提供了一个非常清晰的流程,从原始数据的导入,到肽段和蛋白质的鉴定,再到定量的分析。它还推荐了一些常用的数据处理软件,并对这些软件的使用方法进行了详细的说明。这极大地降低了我学习数据分析的门槛,让我能够更快地独立完成实验数据的分析。我还发现,书中关于蛋白质翻译后修饰(PTM)的章节非常有用。PTM在蛋白质的功能调控中起着关键作用,而这本书详细介绍了如何利用蛋白质组学技术来鉴定和定量PTM,这对于我理解蛋白质的功能调控机制非常有帮助。这本书就像一位经验丰富的老前辈,一步步地指导我如何进行蛋白质组学实验,并且告诉我如何避免那些容易犯的错误。

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我是一名生物技术公司的创始人,我们公司致力于开发基于蛋白质组学的新型诊断试剂和治疗方法。在创业初期,我们团队面临着如何在有限的资源下,快速而高效地完成大量的蛋白质组学实验,并从中找到有前景的研发方向的挑战。《蛋白质组学实验手册》这本书,为我们提供了一个非常宝贵的参考。它以一种非常务实和聚焦的方式,详细介绍了各种蛋白质组学技术在实际应用中的操作要点和注意事项。我们特别关注书中关于高通量筛选和靶点发现的章节。书中详细介绍了如何利用各种定量蛋白质组学方法来快速筛选出与特定疾病相关的蛋白质,以及如何利用这些发现来开发新型的诊断标记物和药物靶点。这为我们公司的研发方向提供了重要的指引。此外,书中还提供了关于如何优化实验流程、降低实验成本的建议,这对于初创公司来说尤为重要。例如,书中关于样本制备和质谱分析的成本效益分析,以及如何选择最经济高效的实验方法,都给我们带来了很多启发。我还欣赏书中关于知识产权和数据共享的讨论。在商业研发中,了解如何保护我们的研究成果,以及如何参与到更广泛的科学交流中,都至关重要。这本书为我们提供了一个非常全面的视角,帮助我们在技术、商业和法律等多个层面都能做好准备。

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我是一名在学术界和工业界都有丰富经验的顾问,专门为生命科学领域的公司提供技术咨询服务。我的工作经常需要我深入了解各种前沿的科研技术,并为客户提供切实可行的解决方案。《蛋白质组学实验手册》这本书,是我近来接触到的最出色的技术指南之一。它以一种非常全面和深入的方式,覆盖了蛋白质组学领域的方方面面,从基础实验技术到高端应用。我最看重的是这本书对不同技术之间优劣势的客观分析,以及如何根据具体的应用场景来选择最合适的技术。例如,书中关于如何选择定量蛋白质组学方法的详细对比,包括同位素标记方法(SILAC, iTRAQ, TMT)与非标记方法(label-free quantification)的适用性分析,以及如何根据研究目标(例如,发现新的生物标志物,或者深入研究信号通路)来决定最合适的策略。这对于客户在选择技术路线时非常有参考价值。此外,书中对数据分析和解读的深入探讨,也是我非常欣赏的一点。它不仅仅是介绍各种算法,更重要的是强调如何将生物学背景与数据分析相结合,从而获得有意义的科学结论。书中还包含了一些关于质量控制和数据标准化的内容,这对于确保研究结果的可靠性和可重复性至关重要。我经常会向我的客户推荐这本书,因为它不仅提供了技术指导,更重要的是它能够帮助客户建立一个清晰的蛋白质组学研究思路,并为他们提供解决实际问题的思路和方法。

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我是一名资深的生物化学家,在某个大型制药公司负责新药研发中的蛋白质组学项目。过去我接触过不少相关的书籍和指南,但《蛋白质组学实验手册》这本书带给我的震撼和启发是前所未有的。这本书的深度和广度都达到了一个非常高的水平,它不仅适合初学者,对于我这样的资深研究者来说,也依然充满了价值。我最看重的是它对最新技术的深入剖析和前沿进展的及时更新。例如,书中关于靶向蛋白质组学的方法,比如PRM和SRM,都有非常详细的原理介绍和实验设计指导,这对于我们开发高特异性的生物标志物非常有帮助。而且,它还讨论了如何结合多种蛋白质组学技术,比如二维凝胶电泳结合质谱,或者iTRAQ/TMT标记的定量蛋白质组学,来解决更复杂的研究问题。书中的数据分析部分也写得非常到位,不仅仅局限于简单的统计学分析,还涉及了生物信息学工具的应用,比如GO富集分析、KEGG通路分析等,这些都是解读蛋白质组学数据的关键。作者们在这一部分也提供了许多实用的建议,包括如何选择合适的数据库、如何设定阈值,以及如何避免常见的生物信息学分析误区。这对于我们理解和解释实验结果至关重要,可以帮助我们从海量的数据中挖掘出真正有价值的信息。这本书的写作风格也非常严谨,引用了大量最新的文献,为读者提供了进一步深入研究的线索。我经常会把它作为我研究项目的参考书,无论是设计新的实验方案,还是解读分析数据,都能从中获得不少灵感。可以说,《蛋白质组学实验手册》已经成为了我工作桌上的一本常备参考资料。

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我是一名大学的教授,负责教授本科生和研究生的分子生物学和生物化学课程。在我多年的教学过程中,我一直致力于为学生寻找最权威、最易懂的教材。《蛋白质组学实验手册》这本书,无疑是我近期最满意的一本教材。它的内容涵盖了蛋白质组学领域的所有核心知识点,并且以一种非常清晰、条理分明的方式呈现出来。我尤其欣赏书中对于基本概念的详细解释,以及对各种实验技术的循序渐进的介绍。这使得即使是初次接触蛋白质组学的学生,也能够轻松理解其原理和操作。书中提供的丰富的插图和图表,将复杂的实验流程和数据分析过程变得可视化,极大地提高了学生的学习兴趣和理解能力。例如,书中关于二维凝胶电泳的详细插图,以及如何从凝胶上切割蛋白质spots,再进行质谱鉴定的过程,对学生来说非常有帮助。此外,书中还提供了许多实际的实验案例和思考题,鼓励学生将理论知识应用于实际问题,培养他们的批判性思维和解决问题的能力。我经常在课堂上引用书中的例子,并要求学生完成书中的思考题,这极大地激发了他们对蛋白质组学研究的兴趣。这本书不仅是一本优秀的教材,更是一本能够帮助学生打下坚实基础,为他们未来从事相关研究做好准备的宝贵资源。

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我是一名独立的项目负责人,负责管理一个致力于理解植物抗逆性的研究团队。我们团队的研究涉及到大量的蛋白质组学实验,用来分析植物在不同胁迫条件下的蛋白质表达变化。在接触《蛋白质组学实验手册》之前,我们团队在实验设计和数据分析方面遇到了一些困惑,尤其是在如何整合不同组学数据(如基因组学、转录组学和蛋白质组学)来构建更全面的研究模型方面。《蛋白质组学实验手册》这本书,为我们提供了非常系统和深入的指导。它不仅详细介绍了蛋白质组学的各种技术,还着重强调了如何将蛋白质组学研究与其他组学研究相结合,以获得更全面的生物学洞察。书中关于植物蛋白质组学应用的章节,尤其令我印象深刻。它详细介绍了如何处理植物组织中的复杂成分,如细胞壁,如何进行蛋白质的提取和纯化,以及在分析植物蛋白质组学数据时需要注意的特异性问题。此外,书中还提供了关于如何利用蛋白质相互作用网络来理解植物抗逆机制的详细方法。这对于我们构建植物抗逆信号网络至关重要。这本书的另一大优点是它对数据分析工具的推荐和使用方法的介绍。它详细解释了如何利用各种生物信息学软件来对蛋白质组学数据进行注释、聚类和通路分析,这大大提高了我们团队在数据分析方面的效率和准确性。这本书的价值在于它能够帮助我们突破单一技术的局限,建立一个跨学科、多层次的研究框架,从而更深入地理解植物抗逆的复杂机制。

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这本《蛋白质组学实验手册》(The Proteomics Protocols Handbook)绝对是我在科研生涯中遇到的最给力的一本工具书了。我是一名刚刚起步的博士生,研究方向是肿瘤标志物的发现,蛋白质组学无疑是我进入这个领域的必经之路。坦白说,刚开始接触这个领域的时候,我感到非常迷茫。网上的资料碎片化,文献里提到的方法也是五花八门,看得我眼花缭乱。直到我的导师推荐了这本书,我才感觉找到了救星。这本书的优点简直太多了,首先,它的内容组织非常清晰,从最基础的蛋白质提取、消化,到复杂的质谱分析和数据处理,几乎涵盖了蛋白质组学研究的每一个关键环节。我尤其欣赏它对于各种实验技术的详尽描述,不仅仅是告诉你“怎么做”,更重要的是解释了“为什么这么做”,以及每一步可能遇到的陷阱和解决方案。举个例子,书中关于蛋白质提取的部分,详细对比了不同裂解液的适用范围和优缺点,还特别提醒了在处理不同类型样本(如组织、细胞、体液)时需要注意的事项。这一点对于新手来说尤为重要,能够避免很多不必要的弯路。而且,书里还提供了大量的优化建议和故障排除指南,遇到实验问题时,我总能在这本书里找到蛛丝马迹,然后自己动手解决。它就像一位经验丰富的导师,随时在我身边指导我。此外,这本书的配图和图表也非常精美,很多复杂的实验流程图一看就懂,比我之前看过的任何资料都要直观。我经常会在实验前仔细阅读相关章节,然后对照着书里的步骤一步步操作,这大大提高了我的实验成功率。总而言之,对于任何想要深入了解或实际操作蛋白质组学实验的研究者来说,《蛋白质组学实验手册》都是一本不可或缺的宝典。

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作为一名正在进行博士后研究的分子生物学家,我主要关注信号转导通路的研究。蛋白质组学技术在解析复杂的细胞信号网络中发挥着越来越重要的作用,因此,掌握这方面的实验技能和理论知识对我的研究至关重要。《蛋白质组学实验手册》这本书,可以说是我近期最大的收获之一。它以一种非常系统和全面的方式,将蛋白质组学领域的核心技术和应用进行了深入的阐述。我特别欣赏书中对于各种定量蛋白质组学方法的详细比较和指导。例如,书中对同位素标记(如SILAC, iTRAQ, TMT)和非标记定量方法的原理、优缺点以及适用场景进行了清晰的分析,这让我能够根据自己的研究目标,选择最合适的定量策略。此外,书中还提供了大量关于实验设计和优化的建议,比如如何提高蛋白质的富集效率,如何减少实验噪音,如何进行样本的标准化等等。这些宝贵的经验对于避免实验中的常见错误,提高实验数据的准确性和可重复性具有极其重要的意义。我还发现,书中对于各种蛋白质组学数据的可视化和解释也提供了非常好的指导。它不仅介绍了常用的统计学方法,还推荐了一些优秀的绘图工具和软件,帮助我能够更直观地展示我的研究结果,并从中发现新的科学洞见。例如,书中关于热图(heatmap)的应用,以及如何解读蛋白质表达谱的变化,让我对信号通路的激活和抑制有了更深刻的理解。这本书已经成为了我实验室中必不可少的参考书,它极大地提升了我对蛋白质组学研究的理解和实践能力。

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