普通昆虫学实验与实习指导 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:科学出版社

作者:许再福

出品人:

页数:85

译者:

出版时间:2010-4

价格:25.00元

装帧:平装

isbn号码:9787030272164

丛书系列:

图书标签:

• 昆虫学
• 昆虫学实验
• 昆虫学实习
• 动物学
• 生物学
• 实验指导
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• 生物科学
• 昆虫识别

探秘微观宇宙：一部关于分子生物学与基因工程的实验手册 本书名称：分子生物学与基因工程：前沿技术与应用实践 图书简介 本书旨在为生物科学领域的研究人员、高级本科生及研究生提供一套全面、深入且极具操作性的分子生物学和基因工程实验指导。它不仅仅是一本描述基础操作的指南，更是一部聚焦于当前生命科学研究最前沿技术和应用领域的实践手册。全书内容紧密围绕现代生物学研究的核心——DNA、RNA、蛋白质的结构、功能及其在生命活动中的调控机制，并详细阐述了如何利用基因工程工具改造生物体以解决实际问题。 第一部分：分子生物学基础技术与原理 本部分系统梳理了分子生物学实验中不可或缺的基础技术，强调了每一步操作背后的生物学原理和潜在的误差控制点。 第一章：核酸提取、纯化与定量 本章首先详细介绍了从不同生物材料（细菌、酵母、植物组织、动物细胞乃至福尔马林固定石蜡包埋组织[FFPE]）中高效提取高质量基因组DNA、质粒DNA和总RNA的方法。内容涵盖了酚氯仿抽提法的精细步骤优化、商业化试剂盒的选择与使用技巧，以及硅胶柱层析法的原理。 重点章节在于核酸的质量控制与定量分析。我们深入探讨了使用紫外分光光度计（NanoDrop）测定A260/A280和A260/A230比值的意义，并详细比较了荧光定量法（如Qubit）相较于紫外法的优势和应用场景。此外，还收录了利用琼脂糖凝胶电泳对核酸完整性进行初步判定的标准图谱和故障排除指南。 第二章：聚合酶链式反应（PCR）及其变体 PCR技术是分子生物学的基石，本章力求详尽。从引物设计的生物信息学原理（Tm值、发夹结构、二聚体抑制）入手，到反应体系的优化（dNTPs、Mg2+浓度、Taq酶的选择），提供了详尽的操作参数表格。 随后，深入介绍了几种关键的PCR变体： 1. 实时荧光定量PCR（qPCR/RT-qPCR）： 详细讲解了SYBR Green法和TaqMan探针法的原理、标准曲线的建立、熔解曲线分析在排除非特异性扩增中的作用，以及绝对定量和相对定量的计算方法（$DeltaDelta C_t$法）。 2. 高保真PCR与长片段PCR： 讨论了新型DNA聚合酶的选择，适用于需要精确测序或构建大片段基因表达载体的应用。 3. 数字PCR（dPCR）： 介绍其原理，作为绝对定量的“金标准”技术，在罕见突变检测中的前沿应用。 第三章：核酸测序与序列分析 本章覆盖了从经典测序到新一代测序（NGS）的过渡。桑格测序的自动化流程和结果判读被详细解析。 重头戏在于对NGS文库构建策略的深入探讨，包括：全基因组测序（WGS）、外显子组捕获测序（WES）、RNA测序（RNA-Seq）的文库制备流程、质量控制标准（如Bioanalyzer分析）以及原始数据的质控（FASTQ文件解读）。本章还提供了基础的生物信息学流程概述，指导读者如何使用常用工具（如BLAST、Primer3）进行序列比对和功能注释。 第二部分：基因工程与重组DNA技术 本部分聚焦于基因的操纵、表达与调控，是生物制药和基因治疗的理论基础。 第四章：限制性内切酶与载体构建 详细收录了超过五十种常用限制性内切酶的切割位点、识别序列和甲基化敏感性，并提供了酶切反应的最佳条件。 载体构建部分是实践的核心： 1. 质粒载体： 讲解了常用载体（如pUC系列、表达载体pET/pCMV）的结构要素（复制起点、选择标记、启动子、终止子）及其选择策略。 2. 克隆技术： 详述了传统双酶切连接法、粘性末端连接法，并重点介绍了现代高效克隆技术，如Gibson Assembly（多片段无缝连接）、TOPO克隆和Gateway重组克隆系统的操作流程与应用优势。 第五章：原核与真核表达系统 本章对比分析了不同宿主系统的优劣。 1. 原核表达（大肠杆菌）： 详细介绍了诱导表达的优化策略（IPTG浓度、诱导温度、表达时间），以及解决包涵体形成问题的应对措施（如变性-复性）。 2. 真核表达系统（酵母、哺乳动物细胞）： 讨论了瞬时转染（Lipofectamine系列）和稳定转染技术的选择。重点阐述了瞬时高表达的优化参数，并指导如何筛选稳定的高表达细胞株。 第六章：基因编辑与定点突变 本章深入介绍了当今最具革命性的基因编辑工具。 1. CRISPR-Cas9系统： 详细解析了sgRNA的设计原则（脱靶效应预测）、Cas9核酸酶的递送方式（质粒、mRNA、RNP复合物），以及在细胞内实现基因敲除（KO）、敲入（KI）或碱基编辑（Base Editing）的完整流程。 2. 定点突变（Site-Directed Mutagenesis）： 提供了基于PCR的Stratagene法和DpnI筛选法的详细实验方案，确保研究者能够精确地引入点突变、插入或缺失。 第三部分：蛋白质分析与相互作用研究 分子生物学实验的终点往往是蛋白质的功能验证。 第七章：蛋白质分离、纯化与鉴定 本章涵盖了从细胞裂解到纯化的全过程。内容包括：不同裂解液的配方选择（温和裂解 vs. 强力裂解）、蛋白酶抑制剂的合理使用。 纯化技术侧重于： 1. 亲和层析（Affinity Chromatography）： 详细指导了His-Tag、GST-Tag等标签蛋白的纯化流程，包括洗脱条件的梯度优化。 2. 离子交换与分子筛层析： 介绍了pH和盐梯度对蛋白质分离的选择性影响。 蛋白质检测方面，详述了SDS-PAGE的电泳条件优化和Western Blotting（免疫印迹）的标准化流程，包括一抗二抗的选择、封闭条件和化学发光/荧光显影技术的应用。 第八章：高级蛋白质组学与相互作用研究 本章介绍了探索蛋白质功能网络的先进技术： 1. 蛋白质互作研究： 详细介绍了酵母双杂交（Y2H）系统的筛选原理和结果判读，以及Co-IP（共免疫沉淀）实验中关键步骤（洗涤条件、抗体选择）的优化。 2. 蛋白质翻译后修饰（PTM）分析： 如何通过磷酸化抗体或特殊的酶切技术来鉴定蛋白质的磷酸化、泛素化等修饰位点。 附录 附录部分提供了分子生物学实验室必备的缓冲液配方（如LB培养基、Tris-EDTA、PBS等）、安全操作指南（生物安全等级、化学品处理）、以及常用生物学数据库（NCBI, UniProt）的使用教程。 本书结构严谨，图表丰富，每项实验步骤均附有详尽的“注意事项”和“常见问题解答（FAQ）”，致力于成为生命科学研究者手中不可或缺的、涵盖从基础到前沿的实用工具书。

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