Drosophila Protocols

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出版者:
作者:Sullivan, William (EDT)/ Ashburner, Michael (EDT)/ Hawley, R. Scott (EDT)
出品人:
页数:697
译者:
出版时间:2008-6
价格:$ 91.53
装帧:
isbn号码:9780879698270
丛书系列:
图书标签:
  • 果蝇
  • 分子生物学
  • 遗传学
  • 实验方案
  • 生物技术
  • 实验室技术
  • 模式生物
  • 发育生物学
  • 基因组学
  • 蛋白质组学
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具体描述

《果蝇遗传学研究手册》 本书汇集了当前果蝇遗传学研究领域最前沿、最经典、最实用的技术方法和实验流程。从基础的果蝇饲养、诱变、品系构建,到复杂的基因编辑、谱系追踪、行为分析,再到新兴的单细胞测序、成像技术在果蝇中的应用,《果蝇遗传学研究手册》为研究人员提供了一站式的解决方案。 核心内容概览: 1. 果蝇培养与品系管理: 优化饲养环境: 详细阐述了不同发育阶段果蝇对温度、湿度、光照、培养基成分等环境因素的需求,并提供了在家系、实验室规模优化饲养方案的指导。 高效诱变与筛选: 介绍了多种经典的诱变方法(如EMS、X射线)及新型诱变剂,并结合分子标记和表型筛选技术,指导读者如何高效地获得和鉴定新的突变体。 品系构建与维护: 提供了构建和维护复杂遗传品系(如转基因品系、基因敲除/敲低品系、基因报告品系)的详细策略,包括多种重组、互换、标记策略,以及品系保存的最佳实践。 2. 基因功能研究技术: 遗传学分析工具: 深入讲解了经典的遗传学分析方法,如连锁分析、补偿分析、遗传背景评估等,帮助读者深入理解基因的功能及其与其他基因的相互作用。 RNAi与CRISPR/Cas9技术: 全面介绍了RNA干扰(RNAi)和CRISPR/Cas9基因编辑技术在果蝇中的应用。从设计引导RNA(gRNA)、选择有效载体系统,到高效导入基因组、验证编辑效率,本书提供了详细的操作步骤和常见问题解决方案。特别强调了如何利用CRISPR/Cas9实现精确的基因敲除、点突变、插入以及同源重组介导的基因修饰。 基因过表达与异位表达: 提供了多种启动子和表达载体的选择指南,以及如何构建和验证基因过表达品系,探讨了异位表达在研究基因功能冗余和发育调控中的应用。 3. 发育生物学研究方法: 胚胎发育观察: 详述了胚胎固定、染色、切片、免疫荧光等经典技术,以及共聚焦显微镜、活体成像等现代技术在观察胚胎形态发生、细胞迁移、基因表达动态变化中的应用。 谱系追踪技术: 提供了多种谱系追踪策略,包括FLARE、Confetti、MADM等,以及如何设计和执行实验以解析细胞命运决定、细胞分化和组织形成过程。 精细组织学与细胞生物学: 涵盖了固定、染色、免疫组化、原位杂交等技术,用于研究细胞结构、细胞器功能、蛋白质定位以及mRNA在组织和细胞中的分布。 4. 神经科学与行为学研究: 神经解剖与连接组学: 介绍了果蝇神经系统的解剖学特点,以及如何利用基因工具(如Gal4/UAS系统、LexA/dLexA系统)精确标记和激活特定神经元群体。本书还探讨了连接组学研究的基础技术和数据分析方法。 行为学分析平台: 详细介绍了多种果蝇行为学实验平台,包括光学追踪系统、迷宫实验、嗅觉/味觉偏好测试、学习记忆训练等,并提供了实验设计、数据采集和统计分析的指导。 光遗传学与化学遗传学: 阐述了光遗传学(Optogenetics)和化学遗传学(Chemogenetics)在调控神经元活动、研究行为与神经环路关系中的应用。 5. 分子生物学与成像技术: 基因克隆与载体构建: 提供了高效、可靠的基因克隆策略,包括限制性内切酶消化、TA克隆、Gibson组装等,以及常用表达载体和报告基因载体的设计与构建。 蛋白质检测与分析: 详细介绍了Western Blot、ELISA、免疫沉淀(IP)、质谱(MS)等技术,用于检测蛋白质表达水平、蛋白质-蛋白质相互作用和蛋白质修饰。 高级成像技术: 深入介绍了共聚焦显微镜、双光子显微镜、超分辨显微镜等技术在果蝇样品成像中的应用,以及如何处理和分析高维度显微图像数据。 6. 组学研究与数据分析: 转录组学: 提供了RNA测序(RNA-seq)在果蝇中的实验设计、样本制备、数据分析流程,包括基因表达差异分析、通路富集分析、转录因子调控网络构建等。 单细胞测序(scRNA-seq): 重点介绍了单细胞RNA测序技术在果蝇发育、疾病模型中的应用,包括细胞分群、细胞类型鉴定、发育轨迹推断等。 生物信息学工具与资源: 整合了常用的果蝇生物信息学数据库、分析软件和脚本,指导读者如何有效利用这些资源进行数据分析和解读。 本书的特点: 实用性与可操作性: 每章都附有详细的实验步骤、试剂列表、仪器设置以及注意事项,确保实验的可重复性和成功率。 前沿性与全面性: 涵盖了果蝇研究领域最热门、最前沿的技术,同时也对经典技术进行了深入的讲解。 针对性强: 专为使用果蝇作为模式生物进行科学研究的研究人员设计,无论是初学者还是资深研究者,都能从中获益。 问题导向: 针对实验中可能遇到的常见问题,提供了详细的故障排除指南和解决方案。 《果蝇遗传学研究手册》不仅仅是一本技术手册,更是一份强大的研究指南,它将帮助您在果蝇这个迷人的模式生物领域,探索生命科学的奥秘,推动前沿研究的进展。

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目录信息

读后感

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用户评价

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我花了大量时间试图从中汲取关于建立稳定遗传系和进行大规模行为学分析的实用技巧,但收获甚微,主要因为本书似乎过于聚焦于那些尖端、极度细化的技术瓶颈,而忽略了基础实验设定的普遍性需求。例如,书中对于利用CRISPR/Cas9系统进行定点突变的部分,洋洋洒洒地记录了上百种不同的sgRNA设计策略及其在特定基因座上的成功率,这无疑是对高级研究者非常有价值的统计数据。但对我而言,我首先需要的是一个可靠、快速的初代突变体生成流程,以及如何从这些初代突变体中筛选出具有可操作表型的稳定后代。书中的描述过于依赖特定的、可能需要昂贵设备或试剂的实验条件,完全没有探讨更经济、更通用的替代方法。读完后,我感觉自己掌握了如何进行“最优化”的实验,却不清楚如何进行“可行化”的实验。我希望能看到更多关于“如果你的培养箱温度波动了怎么办”、“如果你的抗体批次不稳定该如何调整”这类贴近真实实验室困境的讨论,这本书提供的解决方案似乎都建立在一个“理想化”的实验室环境之上,这种脱离实际的完美主义,极大地削弱了其作为一本“指南”的实用价值,让我在日常操作中感到束手无策。

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这本书的叙事风格和组织逻辑简直是为那些已经熟知“行话”的专业人士量身定制的,对于我这样一个希望通过阅读来构建完整知识框架的读者来说,体验犹如进入一座信息密度过高的迷宫。每一个章节之间的逻辑跳跃性极大,从一个复杂的分子标记技术猛然切换到某个特定的神经回路解析方法,中间缺乏必要的过渡和背景铺垫。举例来说,关于眼色变异的遗传学分析部分,它假定读者已经完全理解了孟德尔遗传学的高级变体,并能迅速在脑中构建出多基因互作模型,随后直接展示了基于RNA测序数据的差异表达热图。我试图寻找的,是那种能用清晰的图示和循序渐进的文字解释“为什么这个突变会导致这种表型”的逻辑链条,而不是直接抛出最终的、高度抽象的数据结果。读完后,我能知道“有什么”,但完全不明白“为什么是这样”。它更像是一个大型研究机构内部技术报告的汇编,而不是一本旨在知识传播和教育的教材,其专业性之高,已经到达了某种令人望而生畏的程度。

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这本《果蝇实验指南》着实让我这个初涉模式生物研究的新手感到有些手足无措,书中的内容仿佛是一本为身经百战的专家准备的“速查手册”,而非一本引人入胜的入门读物。我原以为能找到关于果蝇生物学基础、生命周期特点以及常见饲养环境的详尽介绍,毕竟,对于一个需要从零开始建立实验体系的研究者来说,这些“常识性”的知识恰恰是最需要的基石。然而,翻开书页,映入眼帘的却是各种令人眼花缭乱的分子生物学技术和复杂的遗传学操作流程,每一个步骤都假定读者已经熟练掌握了基本的实验室技能和对果蝇生物学有着深刻的理解。比如,对于“如何精确地分离和鉴定早期胚胎阶段的细胞系”这一节,书中直接给出了复杂的试剂配比和时间参数,却丝毫没有解释为何选择这些特定条件,更没有提供任何替代方案或可能遇到的问题排查指南。这使得我这个新手在尝试复现实验时,每走一步都像是在进行一场盲目的猜测游戏,失败是常态,成功却成了偶然。我期待的是那种能带着读者一步步理解“为什么”这么做的书籍,而不是仅仅罗列“怎么做”的技术清单。这本书的深度令人敬畏,但其广度与对初学者的包容性却显得严重不足,更像是一本高端技术手册的集合,而非一本真正意义上的“指南”。

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这本书的排版和索引设计,更是让初次接触它的读者感到挫败。我花费了不成比例的时间仅仅是为了找到一个基础操作的描述。例如,寻找如何进行“低温麻醉果蝇以进行精确定位”的描述,我不得不穿梭于“胚胎学操作”、“幼虫行为分析”和“成年果蝇解剖”等多个看似不相关的章节之间,因为它被归类在了一个我完全意想不到的分类体系下。这表明,本书的作者群可能有着非常独特且高度内部化的知识组织逻辑,这种逻辑对于外部用户来说是极不友好的。一本好的指南应该具备清晰的、可预测的结构,让读者可以快速定位到所需的信息。而这本《果蝇实验指南》更像是一部活字典,你需要确切知道你要查找的术语的“官方”分类名称,否则你将永远迷失在那些令人眼花缭乱的专业缩写和技术专有名词中。对于希望系统学习果蝇实验的门外汉来说,这种结构上的混乱和索引的缺失,极大地拖慢了学习进度,使得原本就困难的上手过程变得更加冗长和痛苦。

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我原本期待这本书能提供一个关于《果蝇生物学》与《实验技术》完美结合的范本,特别是关于如何利用果蝇模型来研究复杂疾病(如神经退行性疾病)的最新进展。然而,这本书似乎将重点完全倾斜到了技术操作的精细度上,对于“研究什么”的科学背景介绍显得蜻蜓点外,缺乏足够的深度和批判性分析。例如,在探讨某种特定信号通路调控衰老机制的实验设计时,书中只是笼统地提到了几个关键蛋白的名字和它们已知的功能,随后便一头扎进了如何使用光遗传学技术来激活或抑制这些蛋白的复杂步骤中。我渴望看到的是对现有文献中不同理论模型的比较,或者至少是关于为什么选择特定疾病模型而非其他模型的论证。这本书给人的感觉是,研究问题已经解决,现在只需要知道如何用最“硬核”的技术去验证它。对于一个希望通过阅读这本书来启发新的研究方向或对现有领域进行宏观了解的读者来说,这种“技术至上”的倾向,使得本书的学术视野显得有些狭隘和偏科。

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