Clinical Microbiology Procedures Handbook

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出版者:Amer Society for Microbiology
作者:Isenberg, Henry D. (EDT)
出品人:
页数:2298
译者:
出版时间:
价格:199.95
装帧:HRD
isbn号码:9781555812904
丛书系列:
图书标签:
  • 临床微生物学
  • 微生物学
  • 实验室技术
  • 医学检验
  • 细菌学
  • 病毒学
  • 真菌学
  • 寄生虫学
  • 诊断
  • 实验手册
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具体描述

精准诊断的基石:现代临床微生物学实践指南 本书全面概述了当前临床微生物学实验室运作所需的核心技术、质量控制标准以及对常见病原体的深入分析方法。它旨在为微生物学专家、技术人员、感染控制人员以及相关领域的研究人员提供一个操作性强、信息详实且与时俱进的参考手册。 本书紧密围绕“从样本到报告”的完整流程展开,涵盖了从样本采集与预处理到最终结果解读和临床意义分析的每一个关键环节。我们聚焦于提供清晰、可重复的操作步骤和深入的理论背景,确保读者能够在新兴技术快速迭代的背景下,依然掌握微生物诊断的坚实基础。 第一部分:实验室基础与质量保证 本部分奠定了现代临床微生物学实验室高效、准确运行的基石。我们详尽阐述了实验室的安全规范、样本的生物学风险评估以及样本的接收、处理和储存的最佳实践。 1.1 实验室生物安全与风险管理: 详细讨论了不同生物安全等级(BSL-1到BSL-3)实验室的设计要求、个人防护装备(PPE)的正确使用指南,以及处理高危病原体(如结核分枝杆菌、高致病性流感病毒)时的标准操作程序(SOPs)。重点关注了样本传输过程中的生物泄漏应急响应机制。 1.2 样本处理与标准化: 深入探讨了血液、尿液、脑脊液(CSF)、呼吸道分泌物、伤口拭子和组织样本的标准化制备流程。涵盖了离心、浓缩、涂片制备及快速直接镜检(如革兰氏染色、抗酸染色)的细微差别和影响因素。强调了前处理步骤对后续培养和分子检测结果的决定性影响。 1.3 质量控制与性能验证: 质量保证(QA)和质量控制(QC)是本部分的核心。我们提供了详尽的内部和外部质量评估方案,包括培养基效能测试、试剂批次验证、仪器校准频率,以及如何根据CLSI(临床与实验室标准化协会)或同等国际标准来建立可接受的性能指标(如敏感性、特异性、报告时限)。详细解释了偏差(Out-of-Specification, OOS)事件的调查流程和纠正预防措施(CAPA)。 第二部分:培养基与病原体分离培养技术 本部分是微生物诊断的经典核心,侧重于微生物的生长、分离和初步鉴定技术,强调了传统培养方法在耐药性检测中的不可替代性。 2.1 培养基的原理与应用: 详尽分类和描述了选择性、培养性、鉴别性培养基的化学成分和选择机制。区分了用于肠道病原体(如MacConkey、HE、XLD)、非发酵革兰氏阴性杆菌、真菌以及厌氧菌培养的专用培养基的准备、储存和适用性测试。 2.2 细菌分离与纯化: 详细阐述了各种临床样本的接种技术,特别是混杂样本(如血液和痰液)中目标菌的梯度稀释和划线分离技术。探讨了不同环境因素(如温度、二氧化碳浓度、氧气张力)对特定细菌(如奈瑟菌属、军团菌)生长的影响。 2.3 培养物初步表征: 介绍了通过菌落形态学、革兰氏染色结果对分离株进行初步分类的系统方法。涵盖了基础代谢测试(如过氧化氢酶试验、氧化酶试验)的正确操作和结果判读,这些是后续更精确鉴定的第一步。 第三部分:高级微生物鉴定与分型 本部分深入探讨了利用生化反应、免疫学方法和质谱技术对分离的微生物进行快速、准确鉴定的现代手段。 3.1 传统生化鉴定系统: 详细解析了基于多重生化反应的API、Enterotube等系统的原理、试剂的有效性检查,以及如何系统性地结合染色结果,构建微生物的生化指纹图谱。特别关注了关键的区分测试(如脲酶、吲哚、动力)。 3.2 自动化生化与免疫学鉴定: 介绍了全自动微生物鉴定系统(如Vitek, Phoenix)的工作流程和内置数据库的更新维护。重点讲解了利用抗原-抗体反应进行快速鉴定的免疫学测试(如乳胶凝集试验、试纸条法)在沙门氏菌、志贺氏菌和链球菌分型中的应用。 3.3 质谱(MALDI-TOF MS)鉴定: 全面介绍基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在微生物快速鉴定中的原理、样本制备(直接上清法、提取法)和数据分析流程。探讨了如何将MALDI-TOF结果与传统方法进行交叉验证,以及克服其在某些菌种(如酵母菌、快速生长非发酵菌)鉴定中的局限性。 第四部分:病原体检测的分子生物学技术 分子诊断已成为快速诊断和耐药监测的支柱。本部分专注于核酸提取、扩增和分析技术在临床微生物学中的实际应用。 4.1 核酸提取与纯化: 详细对比了基于硅胶柱、磁珠和酚氯仿等不同原理的核酸提取方法在处理不同样本(如血液、粪便、尿液)时的效率和纯度差异。强调了提取步骤对后续PCR反应的抑制作用控制。 4.2 定性与定量PCR技术: 深入解析了实时荧光定量PCR(qPCR)的工作流程,包括引物和探针的设计原则、熔解曲线分析和Ct值的可靠性。讨论了针对常见病原体(如结核分枝杆菌、肺炎支原体、人乳头瘤病毒)的单重和多重PCR检测方法的优化。 4.3 等温扩增与快速分子检测: 介绍了如环介导等温扩增(LAMP)等快速、便携的分子技术在床旁检测和资源受限环境中的应用潜力,以及其特异性与敏感性评估标准。 4.4 基因测序基础: 概述了Sanger测序在确认PCR产物和特定基因(如16S rRNA)鉴定中的角色,以及新一代测序(NGS)技术在宏基因组学病原体筛查中的初步应用和数据解读挑战。 第五部分:抗菌药物敏感性试验(AST) AST是指导临床治疗的关键环节。本部分聚焦于确保AST结果的准确性和临床相关性。 5.1 AST原理与标准: 详尽阐述了CLSI M02/M07(琼脂稀释法/微量肉汤微量稀释法)的核心原则,包括培养基的选择(如Mueller-Hinton琼脂的优化)、菌悬液的标准化(McFarland标准校准)、接种密度和培养条件的严格控制。 5.2 自动化AST系统操作: 介绍了全自动药敏系统的操作流程、结果判读逻辑,以及系统自带的质量控制菌株的周期性验证。 5.3 耐药机制检测: 详细介绍了针对特定关键耐药性的检测方法: β-内酰胺酶: 扩展谱β-内酰胺酶(ESBL)和碳青霉烯酶(MBLs)的诱导和筛选试验(如与克拉维酸联用)。 万古霉素和替加环素: 针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和不动杆菌属的最低抑菌浓度(MIC)的确认性测试。 分枝杆菌: 固体和液体培养基中对一线和二线抗结核药物的敏感性测试流程。 5.4 结果解释与临床关联: 强调了如何将实验室测得的MIC值与当前临床指南中的敏感/中介/耐药(S/I/R)断点进行准确匹配,并讨论了异质性耐药(Heteroresistance)的识别和报告策略。 第六部分:特殊病原体与非常规样本处理 本部分针对临床上具有挑战性的微生物群体和样本类型,提供了专业化的检测方案。 6.1 病毒学与细胞培养: 讨论了利用细胞培养分离和鉴定特定病毒(如CMV、HSV)的流程,以及对培养物进行直接免疫荧光(DFA)或抗原检测的方法。 6.2 厌氧菌与微需氧菌: 详细说明了厌氧培养箱的操作、气体混合物的控制,以及针对拟杆菌属、梭状芽孢杆菌的专有培养基和鉴定特征。 6.3 真菌学诊断: 涵盖了酵母菌和丝状真菌(霉菌)的显微镜识别技术、专用培养技术(如室温培养、PDA培养)以及关键的药敏试验(如氟胞嘧啶、棘白菌素类药物)。 6.4 寄生虫学基础: 介绍了粪便样本中常见寄生虫卵囊和滋养体的形态学识别技术,以及原虫的特殊染色方法(如改良的铁苏木素染色)。 结论: 本书结构严谨,内容高度实用,旨在成为临床微生物学实验室日常工作和专业培训中不可或缺的权威资源,确保诊断流程的标准化、高效性和准确性,最终服务于患者的精准治疗。

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