生理学实验指导 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:人民卫生出版社

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页数:0

译者:

出版时间:2000-01-01

价格:12.5

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isbn号码:9787117027625

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《现代分子生物学技术：原理与实践》 图书简介 引言：解码生命奥秘的钥匙 生命科学正以前所未有的速度发展，分子生物学作为其核心分支，为我们理解生命的起源、演化、结构和功能提供了最为精微的视角。本书《现代分子生物学技术：原理与实践》并非一本涵盖生命体生理活动宏观调控的教材，而是专注于那些赋予研究者洞察细胞内部微观世界的“工具箱”。它旨在为生命科学、生物技术、医学以及相关交叉学科的科研人员、高级本科生和研究生提供一套全面、深入且高度实用的分子生物学实验技术指南。本书的重点在于技术的原理阐释、操作的细节把握以及数据的有效解读，而非对特定生物系统（如人体生理系统）的全面描述。 第一部分：基础构建模块——核酸操作的基石 分子生物学的核心在于对核酸（DNA和RNA）的精确操纵。本部分将详细拆解支撑所有分子生物学实验的基础技术。 第一章：核酸的分离、纯化与定量 本章首先探讨从复杂生物基质（如组织、细胞、血液、微生物培养物）中高效、高纯度获取基因组DNA、质粒DNA和各种RNA（mRNA、tRNA、非编码RNA）的方法。我们将深入比较传统的酚氯仿提取法与现代基于硅胶柱或磁珠的快速纯化系统的异同。重点分析影响提取效率的关键因素，例如裂解液的成分、蛋白酶K的使用时机和去污染步骤。 在纯化之后，精确定量是后续实验成功的前提。本章详细介绍紫外分光光度法（NanoDrop的应用及局限性）、荧光定量法（Qubit系统）在核酸浓度测定中的精度差异。对于RNA的质量评估，我们将详述琼脂糖凝胶电泳和高通量RNA完整性分析仪（如Agilent Bioanalyzer）在评估RIN值（RNA Integrity Number）上的原理和临床/科研意义，强调降解对下游转录组分析的致命影响。 第二章：电泳、Southern/Northern Blotting的深度解析 本章复习和深化了凝胶电泳技术。除了常规的DNA分离，我们详细讨论了高分辨率的两维电泳在蛋白质分析中的应用（尽管本书主体是分子技术，但电泳作为分离技术的基础需要被提及）。 重点篇幅留给Southern Blotting（DNA检测）和Northern Blotting（RNA检测）。我们不仅仅介绍如何制作探针（放射性标记与非放射性标记，如地高辛、生物素），更侧重于杂交条件的优化——包括预杂交、杂交温度和洗涤条件的精确控制，以确保序列特异性。同时，本书提供了故障排除指南，用于解决高背景信号或探针无法结合等常见问题。 第二部分：基因克隆与重组：改造生命蓝图 理解和重组基因是分子生物学的核心任务。本部分聚焦于构建体外重组DNA和将其导入宿主细胞的技术。 第三章：聚合酶链式反应（PCR）及其高级变体 PCR无疑是分子生物学中最具革命性的技术。本章从酶学角度阐述Taq聚合酶的耐热性、保真性（如Pfu酶的应用），并详细分析引物设计（退火温度计算、二级结构避免）的关键原则。 更重要的是，本章详述了PCR的多种高级应用： 1. 实时荧光定量PCR (RT-qPCR): 深入探讨荧光报告系统（SYBR Green、TaqMan探针）的定量原理、标准曲线的建立、内参基因的选择与验证，以及如何准确计算目标基因的表达倍数变化。 2. 反转录PCR (RT-PCR): 区分一步法和两步法，并针对cDNA合成的效率优化给出具体建议。 3. 高保真PCR与ChIP-PCR: 介绍如何通过酶的筛选和循环条件的调整来提高扩增的准确性；以及染色质免疫共沉淀PCR在研究蛋白质-DNA相互作用中的应用流程。 第四章：分子克隆与载体构建 本章将克隆技术从理论推向实践。我们详细比较了限制性内切酶的“粘性末端”和“平末端”操作，以及T4 DNA连接酶的连接机制。 重点阐述现代无缝克隆技术，包括： 限制性消化-连接法 (Restriction-Ligation): 传统方法的优化。 TA克隆: 适用于Taq酶扩增产物的方便快捷方法。 重组酶介导的克隆 (Gateway/TOPO): 介绍这些商业化系统如何通过特异性的重组反应实现高效的载体交换，尤其是在构建多个表达或报告载体时的优势。 载体选择: 深入比较原核表达载体（如pET系统及其诱导剂IPTG的作用机制）、真核表达载体（启动子选择如CMV, SV40）和病毒载体（腺病毒、慢病毒）的特性和适用场景。 第五章：基因编辑与定点突变技术 随着基因组编辑技术的爆发，本章将其作为现代分子生物学不可或缺的一部分。 定点突变技术: 详细介绍基于PCR的定点突变方法（如QuikChange），并强调突变体的筛选和测序验证的重要性。 CRISPR/Cas9系统: 虽然CRISPR技术在生物学应用广泛，本书侧重于其作为分子工具的构建和验证。我们将分析sgRNA的设计原则，如何构建Cas9表达载体，以及如何评估基因编辑的效率（通过T7E1分析法或测序）。 第三部分：蛋白质的表达、纯化与互作分析 核酸研究的最终目的是理解蛋白质的功能。本部分聚焦于蛋白质的生产和功能验证。 第六章：重组蛋白的表达与纯化 本章是生物技术实践的核心。我们首先探讨原核系统（大肠杆菌）和真核系统（酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞）在表达复杂蛋白时的优劣势。特别关注大肠杆菌表达中常见的表达不溶性（形成包涵体）问题及其复性策略（变性、复性缓冲液的精确配比）。 纯化部分详细讲解亲和层析（Affinity Chromatography）的原理： His-Tag/GST-Tag/MBP-Tag: 各种标签的化学性质、选择特定标签的理由以及洗脱条件的设计。 离子交换和疏水层析: 作为二级和三级纯化的补充手段，优化分离分辨率的参数。 第七章：蛋白质的定量与功能分析 蛋白质定量是实验设计的基础。本章介绍Bradford法、BCA法和Lowry法的化学基础和干扰因素。 在功能分析方面，本书介绍： Western Blotting (免疫印迹): 从抗体选择、一抗二抗孵育优化到化学发光或荧光检测的细节，确保信号的高信噪比。 酶联免疫吸附测定 (ELISA): 详细解析间接ELISA、竞争性ELISA和夹心ELISA的流程，以及如何建立和校准标准曲线进行定量。 第八章：蛋白质相互作用研究的进阶技术 理解蛋白质如何协同工作需要分析它们之间的物理相互作用。 酵母双杂交系统 (Y2H): 介绍构建“捕获”和“诱饵”载体，以及如何筛选阳性克隆。 Co-IP (共免疫沉淀): 详细说明IP条件的优化，包括温和裂解以保持蛋白复合物完整性的必要性，以及如何利用WB来确认互作。 FRET/BRET: 介绍基于荧光共振能量转移的生物物理方法，用于在活细胞内实时监测蛋白质间的接近度。 结论：技术整合与数据解读 本书最后强调，单一技术的结果往往不足以下定论。成功的分子生物学研究依赖于多平台技术的整合验证（如：qPCR数据需通过Western Blot验证，ChIP结果需通过荧光报告系统确认）。本书的最终目标是培养研究者一种批判性的思维模式，能够根据具体实验目的，精确选择、优化和解读分子生物学技术所得的结果。 适用对象 分子生物学、生物化学、细胞生物学、基因工程、生物制药、生物医学工程等专业的科研工作者和研究生。本书不涉及宏观的生理学概念、疾病的病理机制或药物作用的整体药理过程，其关注点始终锁定在分子层面的实验操作和技术原理。

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这本书的编排方式，真的是让我眼前一亮。与我之前看过的很多教材不同，它没有采用那种一本正经的学术腔调，而是用一种非常亲切自然的语言，就像一位经验丰富的老师在耳边细细讲解。翻开第一页，就感觉扑面而来的不是冰冷的公式和图表，而是对生命活力的赞叹和对探索未知的好奇。它在引入每一个实验主题时，都会先讲述一个引人入胜的背景故事，或者提出一个发人深省的问题，立刻就能抓住读者的注意力。然后，它会非常细致地介绍实验的目的、原理，以及所需要的器材和试剂。让我觉得非常人性化的是，它还为初学者设计了一些“小贴士”，提示一些容易出错的地方，或者是一些可以拓展思考的方向。最令我惊喜的是，书中的实验设计都非常巧妙，利用常见的材料和设备，就能模拟出复杂的生理现象。这让我觉得，科学研究并不一定需要昂贵的仪器和复杂的环境，更重要的是一种思考和探索的精神。而且，它还鼓励我们进行小组讨论和合作，这让我觉得学习不再是孤军奋战，而是一个充满协作和交流的快乐过程。这本书让我真正体会到了学习的乐趣，它不仅仅是一本实验指导书，更是一本点燃我科学热情的心灵指南。

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拿到这本书，第一感觉就是包装非常朴实，没有那些花里胡哨的设计，一下子就抓住了我这种务实派的心。打开来，里面的内容就像它的外表一样，扎实而有条理。首先，让我印象深刻的是它对每一个实验的背景介绍都写得非常清晰，不是那种敷衍的几句话，而是能让你明白这个实验的意义和它能解决什么样的问题。我之前看过一些其他资料，往往是直接跳到实验步骤，让人摸不着头脑。但这本书不一样，它会告诉你，为什么我们要进行这个实验，它与我们所学的理论知识有什么联系。然后就是实验步骤，简直是事无巨细，连我这种动手能力不太强的人，都能照着一步一步做。而且，它还考虑到了可能出现的各种问题，给出了相应的注意事项和应对方法，这让我感到非常安心。最关键的是，它在每个实验结束后，都会留出一些思考题，这些题目不是简单地让你复述实验过程，而是引导你去分析实验结果，思考实验的局限性，甚至是提出改进意见。这让我觉得，这本书不仅仅是教我如何操作，更重要的是培养我的批判性思维和解决问题的能力。我个人觉得，对于初学者来说，这本书的价值远超于它本身的定价，真的是一本值得入手的好书。

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这本书的出现，就像是给我学习过程中的一片迷雾，驱散了无数困惑。我一直觉得理论知识的学习，如果不能与实践相结合，就容易变得空洞和难以理解。这本书恰恰填补了这一空白。它提供了一个非常系统的实验平台，让我有机会亲身体验那些书本上的抽象概念。例如，在学习血液循环的部分，书中设计了一个能够模拟心脏跳动和血液流动的实验，让我能够直观地看到血流的速度、压力等变化，这比单纯阅读文字要深刻得多。同时，它对实验仪器的介绍也非常详细，让我了解了每一种仪器的工作原理以及在实验中的作用，这对于我今后独立操作很有帮助。书中的实验也涵盖了人体各个重要的生理系统，从最基础的细胞生理，到复杂的系统生理，都有相应的实验设计。而且，它非常注重培养动手能力和科学探究精神。在实验过程中，它鼓励我们去观察、去记录、去分析，并且在实验报告的撰写方面也给出了指导性的建议。我觉得，通过这样的实践，我不仅仅是掌握了实验技能，更重要的是，我学会了如何用科学的方法去认识世界，去解决问题。这本书让我对生理学这门学科产生了前所未有的浓厚兴趣，感觉自己正在一步步成为一个合格的科研工作者。

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这本书的厚度，足以让人感受到其内容的丰富程度。我本来以为一本实验指导书，无非就是照着步骤操作，但这本书却颠覆了我的认知。它不仅仅是告诉你“怎么做”，更重要的是告诉你“为什么这么做”。在每一个实验的讲解中，它都会深入剖析其背后的生理学原理，将抽象的概念具象化，让我能够更深刻地理解实验的意义。而且，书中的插图非常清晰，有些甚至是动态的，能够帮助我更好地理解复杂的生理过程。更让我印象深刻的是，这本书在实验设计上，非常注重科学性和严谨性。它不仅提供了标准的操作流程，还详细列出了实验过程中可能出现的误差来源，以及如何去控制这些误差。这让我意识到，科学实验需要细致入微的态度和严谨的逻辑思维。在完成实验后，它还会引导我们进行数据分析和结果讨论，这不仅能够巩固我们对实验内容的理解，还能培养我们的独立思考能力和解决问题的能力。我觉得，这本书的价值在于它不仅仅是教会了我如何完成一个实验，更是教会了我如何去思考，如何去探索，如何用科学的方法去认识我们自身。它让我觉得，生理学不再是一门枯燥的学科，而是一场充满乐趣和挑战的生命探索之旅。

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这本书我拿到手的时候，还真是被它沉甸甸的厚度给惊到了。翻开目录，一堆细致的实验步骤和原理讲解扑面而来，感觉就像是进入了一个充满未知探索的实验室。我之前对生理学一直有种朦胧的向往，觉得人体真的太神奇了，但又苦于没有实践的机会。这本书简直就是我踏入科学殿堂的敲门砖，它没有那种枯燥的理论堆砌，而是用一种非常直观的方式，一步步引导你去理解生命活动的奥秘。比如，里面关于心血管系统、呼吸系统、神经系统的实验设计，都非常贴近实际，我甚至能想象到自己戴上手套，拿着试剂，在老师的指导下小心翼翼操作的样子。书中的插图也非常精美，那些关于细胞结构、器官功能的图示，比任何文字描述都来得生动形象，能帮助我迅速建立起知识框架。而且，它还提供了很多实验前的准备工作和实验后的讨论环节，这让我觉得不仅仅是完成了一个操作，而是真正地在学习和思考。我尤其喜欢它在实验结束后，会引导我们去分析数据，得出结论，这培养了我科学研究的严谨性。总而言之，这本书让我感觉，生理学不再是遥不可及的学科，而是充满了乐趣和挑战的实践过程，让我对未来的学习充满了期待。

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