蛋白质纯化实验指南 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:

作者:R.J.辛普森 编

出品人:

页数:803

译者:

出版时间:2004-6

价格:98.00元

装帧:

isbn号码:9787030133878

丛书系列:

图书标签:

• 短短的
• 蛋白质纯化
• 生物化学
• 实验指导
• 分子生物学
• 蛋白质组学
• 实验室技术
• 生物技术
• 分离纯化
• 实验方案
• 蛋白质分析

《生物分子分离与纯化技术》 概述 本书是一部全面介绍生物分子分离与纯化核心技术及其应用领域的专业著作。从基础理论到前沿技术，系统梳理了生物大分子（包括蛋白质、核酸、多糖、脂质等）在复杂的生物混合物中进行高效分离和高纯度提取的关键步骤和方法。本书旨在为生命科学、生物技术、医药研发、食品科学、环境科学等领域的科研人员、研究生以及相关从业人员提供一套实用、详尽的技术指导和理论参考，帮助读者掌握从样品制备、初步分离到精细纯化的全过程，并理解不同纯化策略背后的科学原理。 内容梗概 第一部分：生物分子分离纯化的基础理论与策略 本部分将深入探讨生物分子分离纯化的基本原理，包括但不限于： 分子特性与分离依据： 详细阐述不同类型生物分子的理化性质，如分子量、电荷、疏水性、溶解度、空间结构、生物活性等，以及这些特性如何在分离过程中被利用。 分离纯化过程的设计： 介绍设计高效分离纯化方案的关键考量，包括目标分子的性质、样品复杂度、纯度要求、回收率目标、成本效益以及时间限制等。 基本分离技术回顾： 简要回顾传统但依然重要的分离技术，如离心（差速离心、密度梯度离心）、沉淀（盐析、有机溶剂沉淀、等电点沉淀）、透析和超滤等，并分析其在不同纯化阶段的应用。 第二部分：现代生物分子分离纯化技术详解 本部分将详细介绍当前主流的、应用广泛的生物分子分离纯化技术： 色谱技术： 亲和层析（Affinity Chromatography, AC）： 深入解析亲和层析的原理，包括配基-目标分子相互作用的特异性，介绍常见的配基类型（如抗体、酶抑制剂、受体配体、金属螯合等）及其在不同生物分子纯化中的应用。详细讲解固定相的选择、洗脱策略以及工艺优化。 离子交换层析（Ion Exchange Chromatography, IEC）： 详细介绍阳离子交换和阴离子交换层析的原理，阐述pH、离子强度对目标分子与固定相结合及洗脱的影响。重点介绍不同强度的离子交换剂（如DEAE、CM、SP、Q等）的选择及其在分离带电生物分子（如蛋白质、核酸）中的应用。 疏水相互作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography, HIC）： 阐述疏水相互作用层析的原理，即利用目标分子表面疏水区域与疏水性填料之间的疏水键合作用进行分离。介绍不同盐浓度和疏水性填料的选择，以及其在分离结构变化或高浓度蛋白质中的优势。 尺寸排阻层析（Size Exclusion Chromatography, SEC），也称凝胶过滤层析（Gel Filtration Chromatography）： 详细介绍其基于分子大小进行分离的原理，分析不同孔径的填料如何有效分离不同分子量的物质。重点讨论其在蛋白质分子量测定、缓冲液交换和高分子量聚集体去除方面的应用。 反相高效液相色谱（Reverse-Phase High-Performance Liquid Chromatography, RP-HPLC）： 介绍反相层析的原理，即利用目标分子与固定相之间的疏水作用进行分离。重点关注其在高分辨率分离小分子肽段、寡核苷酸以及特定蛋白质中的应用，并讨论其对生物分子活性的潜在影响。 其他重要色谱技术： 简要介绍或专题讨论如模拟移动床（Simulated Moving Bed, SMB）色谱、电感应色谱（Electrokinetic Chromatography, EKC）等更复杂或特定应用的技术。 电泳技术： 凝胶电泳（Gel Electrophoresis）： 详细阐述SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）在蛋白质分离、分子量测定和纯度分析中的应用。介绍非变性凝胶电泳在维持蛋白质活性和分离同工酶方面的作用。 二维电泳（Two-Dimensional Electrophoresis, 2D-PAGE）： 深入解析等电聚焦（Isoelectric Focusing, IEF）与SDS-PAGE结合的二维电泳技术，强调其在复杂蛋白质组学研究中高分辨率分离和鉴别蛋白质的强大能力。 脉冲场凝胶电泳（Pulsed Field Gel Electrophoresis, PFGE）： 介绍其在高分子量DNA分离中的独特优势。 膜分离技术： 超滤（Ultrafiltration, UF）： 详细介绍超滤的工作原理、不同截留分子量（Molecular Weight Cut-Off, MWCO）膜的选择，以及其在浓缩、脱盐和缓冲液交换中的应用。 微滤（Microfiltration, MF）： 阐述微滤在去除颗粒物、细菌和细胞碎片中的作用。 渗析（Dialysis）： 回顾渗析作为缓冲液交换和低分子量物质去除的基本方法。 细胞分离与处理技术： 细胞破碎与匀浆： 介绍机械法（匀浆器、超声破碎仪、高压均质机）、酶解法和化学/渗透压裂解等多种细胞裂解方法，及其对后续分离纯化的影响。 细胞器分离： 阐述差速离心和密度梯度离心在分离细胞器（如核、线粒体、内质网）中的应用。 细胞分离技术： 简要介绍流式细胞术（Flow Cytometry）和免疫磁珠分选（Magnetic-Activated Cell Sorting, MACS）等用于分离特定细胞类型的方法。 第三部分：生物分子纯化工艺的优化与放大 纯化工艺的优化： 探讨如何通过系统性的实验设计（Design of Experiments, DoE）来优化各分离步骤的参数，以达到最佳的纯度、收率和效率。 纯化工艺的放大（Scale-up）： 介绍从实验室规模到中试乃至工业生产规模放大纯化工艺时需要考虑的关键因素，包括设备选择、流体力学、传质传热以及成本控制。 下游加工（Downstream Processing）的挑战与解决方案： 讨论在纯化过程中可能遇到的蛋白变性、聚集、降解等问题，以及相应的预防和解决策略。 第四部分：纯化产品的分析与质量控制 纯度检测方法： 详细介绍SDS-PAGE、HPLC（如RP-HPLC、SEC-HPLC）、质谱（Mass Spectrometry, MS）等用于评估纯化产品纯度的方法。 生物活性测定： 强调在纯化过程中保持生物分子（如酶、抗体、生长因子）活性的重要性，介绍各种生物活性检测的原理和方法。 结构鉴定与表征： 简要介绍光谱学（UV-Vis、CD、荧光）、NMR、X-ray晶体学等用于研究分子结构的方法。 质量控制标准： 讨论在不同应用领域（如医药、诊断）对纯化产品的质量控制要求和标准。 第五部分：特定生物分子的纯化实例与应用 蛋白质纯化实例： 选取不同来源（如重组蛋白、天然提取蛋白）和不同类型（如酶、抗体、结构蛋白）的蛋白质纯化实例，详细展示具体的实验步骤、参数设置和结果分析。 核酸纯化： 介绍基因组DNA、质粒DNA、RNA（mRNA、miRNA）以及寡核苷酸的提取和纯化方法。 其他生物分子： 简要提及多糖、脂质等其他重要生物分子的分离纯化技术。 应用展望： 结合生物医药、诊断试剂、基因治疗、生物工程、食品添加剂等领域，探讨纯化技术在推动科学研究和产业发展中的重要作用。 特点与价值 本书的最大特点在于其理论与实践的紧密结合。书中不仅深入浅出地讲解了各种分离纯化技术的科学原理，更提供了大量图表、流程图和具体的实验操作指导，以及常见的技术问题分析与解决方案。通过丰富的实例，读者可以清晰地了解不同技术在实际操作中的应用细节，从而有效规避实验风险，提高实验成功率。 《生物分子分离与纯化技术》将为研究人员提供一个系统性的学习平台，帮助他们建立扎实的理论基础，掌握先进的实验技能，并能够根据实际需求设计、优化和执行复杂的分离纯化方案，为生命科学研究和生物技术产业的发展提供强有力的技术支撑。

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这本书的排版和图文质量给我留下了极佳的印象。作为一本工具书，清晰度是生命线。我手里拿着这本书时，感觉到它的纸张厚度适中，油墨印刷非常清晰，即便是那些复杂的图谱和电泳条带照片，细节也纤毫毕现。最让我惊喜的是，作者在描述关键步骤时，往往会配上高分辨率的实物操作图，而不是那种模糊不清的示意图。比如在描述如何正确装柱和下样时，图示的细节精确到了缓冲液气泡的消除技巧，这种对细节的极致追求，在其他同类书籍中是很少见的。此外，附录部分的表格资料也非常实用，各种缓冲液配方和常用试剂的批次稳定性建议，都是在实际工作中积累下来的宝贵经验。这本书的编排逻辑非常流畅，从前期的样品制备到最终的纯度鉴定，章节之间的衔接自然得如同行云流水，根本不需要来回翻找，整体阅读体验非常顺畅和愉悦。

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这本《蛋白质纯化实验指南》真是一本让人茅塞顿开的宝典！我作为一个初入实验室的研究生，面对琳琅满目的层析柱和试剂，简直手足无措。这本书的讲解方式非常直观，它没有过多地堆砌晦涩的理论，而是将每一步操作都拆解得极为细致，仿佛一位经验丰富的前辈手把手在教你。特别是对于不同类型蛋白质的疏水性、离子交换特性以及分子大小的判断，书中提供了大量实用的经验法则和快速筛选策略。我记得有一次纯化一个融合蛋白，常规的镍柱亲和层析效果很不理想，原因在于我的标签和背景蛋白的非特异性结合太强。这本书里提到的“低浓度咪唑洗脱后进行梯度洗脱优化”的小技巧，简直是救命稻草，帮我迅速提高了纯度。而且，书中对常见问题的排查和解决方案也总结得非常到位，比如“为什么你的目标蛋白在SDS-PAGE上看起来很干净，但在天然电泳上却有很多杂峰？”这类棘手问题，都有深入的剖析和实际操作的建议。读完它，我感觉自己对蛋白质纯化的整体流程不再是盲目的摸索，而是有了一套清晰、可靠的逻辑框架，大大缩短了我的摸索时间，让实验的成功率直线上升。

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从一个实际操作者的角度来看，这本书最大的价值在于其极强的可操作性和健壮性。很多教科书上的方法在真实世界的复杂样品中往往会“水土不服”，但这本书似乎预料到了这一点。它不仅告诉你“做什么”，更详细地阐述了“如果出现A情况，应该如何微调参数B和C以达到D效果”。例如，在进行疏水层析（HIC）时，不同蛋白质对硫酸铵的盐析敏感度不同，这本书提供了一个基于蛋白质等电点和疏水性区域的初步估算模型，帮助读者快速设定初始条件，避免了盲目尝试大量的盐浓度。这种“故障排除”式的写作风格，让我在面对实验低谷时，不会感到绝望，因为书里早就为我准备好了B计划、C计划乃至D计划。它不是一本高高在上的理论指导，而是一本真正陪你熬夜在实验室，在你焦头烂额时能提供切实帮助的、可靠的战友手册。

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我注意到这本书在方法学的更新上做得非常出色。它没有固步自封于经典的离子交换和凝胶过滤技术，而是花了相当篇幅来介绍近年来新兴的、高通量的纯化手段。比如，对于一些低表达量的膜蛋白，书中详细讨论了使用液相色谱系统（FPLC）结合多维层析的串联策略，并对不同模式的层析柱的优缺点进行了客观的对比分析。它甚至提到了利用片流电泳（Free-flow electrophoresis）进行初步分离的思路，这在很多基础教程里是找不到的。这使得这本书的适用性大大拓宽，它不仅能服务于传统生物化学实验室，对于那些需要处理复杂样品体系，如噬菌体展示或细胞裂解物初期富集的团队也极具参考价值。对我来说，它像一个时刻更新的数据库，确保我掌握的不是过时的技术，而是当前领域内最前沿、最高效的分离策略。这种前瞻性是其区别于其他陈旧教材的关键所在。

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如果说市面上大多数实验手册都是枯燥的“菜谱”，那么这本《蛋白质纯化实验指南》无疑是一部充满洞察力的“哲学著作”。它探讨的深度远超出了基础操作层面。我特别欣赏作者对“设计”一个纯化策略的强调，而不是简单地“执行”一个既定流程。书中对亲和层析介质的选择、填料的再生周期，以及不同流速对分离效率的影响机制，都有非常深刻的论述。这让我开始思考，为什么这个步骤是有效的，背后的分子间作用力究竟是什么。它引导读者从“知道怎么做”跃升到“知道为什么这么做”，这对于培养科研人员的独立思考能力至关重要。我尝试着用书中的思路去优化我导师之前的一个陈旧流程，结果发现通过调整pH梯度和盐浓度梯度，目标蛋白的纯度竟然提高了近30%，而操作时间反而缩短了。这本书不仅仅是教你技术，更是在教授一种严谨的、基于原理的实验思维方式，对任何想深入理解生物大分子分离科学的人来说，都是一份不可多得的精神食粮。

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