Isolated Hepatocytes Preparation, Properties and Applications pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:Elsevier Science Ltd

作者:Michael N. Berry

出品人:

页数:480

译者:

出版时间:1991-12

价格:USD 240.75

装帧:Hardcover

isbn号码:9780444813022

丛书系列:

图书标签:

• 肝细胞
• 分离
• 培养
• 肝脏
• 生物化学
• 细胞生物学
• 药物代谢
• 毒理学
• 肝功能
• 生物医学工程

细胞培养技术：从基础到前沿的深度探索 图书名称： 《细胞培养技术：从基础到前沿的深度探索》 图书简介： 本书全面、系统地阐述了现代细胞培养技术的基础原理、操作规范、应用领域及其未来发展趋势。作为一本集理论深度与实践指导性于一体的专业著作，它旨在为生命科学研究人员、生物技术工程师以及相关专业学生提供一个全面、详实的技术指南和参考平台。 第一部分：细胞培养的理论基石与实验室准备 第一章：细胞生物学基础回顾与培养体系的构建 本章首先对细胞生物学的核心概念进行了复习，重点聚焦于细胞的增殖、分化、衰老和凋亡机制，这是理解细胞培养动态过程的关键。随后，深入探讨了细胞培养环境的各个组成要素： 培养基的精细构成： 详细解析了基础培养基（如DMEM, RPMI-1640, MEM等）的营养成分、缓冲系统（碳酸氢钠/HEPES体系）的选择与调控，以及痕量元素和维生素的作用。特别分析了血清（FBS、特级牛血清、人血清）替代品和无血清培养基（Serum-Free Media, SFM）的优劣势及其在特定研究中的应用策略。 气体环境与pH值控制： 阐述了$5% ext{ CO}_2$对培养体系酸碱平衡维持的必要性，并讨论了不同细胞类型对氧气分压（常氧、低氧/缺氧诱导）的响应机制。 无菌操作的黄金标准： 详细描绘了无菌工作台（超净台）的正确使用流程、仪器灭菌方法（高压蒸汽灭菌、干热灭菌、化学消毒）以及实验人员的个人防护要求，强调了交叉污染和微生物污染的预防措施。 第二章：细胞株的获取、鉴定与管理 本章聚焦于细胞来源的可靠性和培养系统的稳定性。 细胞来源与获取： 区分原代细胞、二级细胞系和永生化细胞系的特点。指导读者如何安全、合规地获取符合研究需求的细胞株。 细胞鉴定技术： 详述了细胞形态学观察、细胞计数（血球计数板、自动细胞计数仪）、活性/活力检测（MTT, CCK-8, 吖啶橙/碘化丙啶双染）等常规方法。此外，重点介绍了分子生物学鉴定技术，如短串联重复序列（STR）分析在物种和细胞株身份确认中的应用，以避免研究中的溯源性错误。 细胞库的建立与维护： 规范了冻存过程的优化（慢速冷冻、程序降温仪的使用），以及复苏后的细胞质量评估标准。强调了标准操作程序（SOP）在确保细胞库长期稳定性和批次间一致性方面的重要性。 第二部分：核心培养技术与专业化操作 第三章：贴壁细胞与悬浮细胞的培养策略 本章区分了两种主要的培养模式及其特有的技术挑战。 贴壁细胞的传代与传代优化： 详细介绍了胰酶（Trypsin）和胶原酶（Collagenase）等解离酶的选择、作用机制、最佳作用时间和失活方法。讨论了细胞铺板密度对增殖速率和表型维持的影响。 悬浮细胞的培养与高密度扩增： 阐述了旋转培养瓶（Spinner Flask）、滚瓶（Roller Bottles）和生物反应器（Bioreactor）在处理大量悬浮细胞时的适用性。重点分析了搅拌速度对细胞沉降和营养物质分布的影响。 细胞传代比例的科学计算： 提供了精确计算细胞代数（Passage Number）和确定最佳传代时间点的数学模型与实例分析。 第四章：原代细胞分离与初级培养 本章是针对从组织中直接分离和培养细胞的关键技术指南。 组织匀浆与酶消化： 详细阐述了针对不同组织（如肝脏、肾脏、皮肤、血管）的预处理方法、机械分离技术，以及针对胶原酶、弹性蛋白酶和链霉蛋白酶混合物在酶消化过程中的浓度优化和时间控制。 密度梯度离心分离： 介绍了Ficoll或Percoll梯度离心技术在分离特定细胞群（如淋巴细胞、内皮细胞前体）中的应用和参数设置。 初级培养的挑战与分化： 讨论了原代细胞在体外培养中快速衰老的现象，以及如何通过添加特定的生长因子和基质来延长其稳定培养的时间窗口。 第五章：三维（3D）细胞培养系统的应用 随着对体内环境模拟需求的增加，3D培养技术已成为前沿研究的核心。 水凝胶基质的选择与优化： 深入比较了天然高分子基质（如胶原蛋白、纤维连接蛋白、层粘连蛋白、琼脂糖）和合成聚合物基质（如PEG水凝胶）的机械性能和生物相容性。 球状体（Spheroid）的构建技术： 详细介绍了U型底板、磁性微球法、悬浮滴技术等构建均匀球状体的不同方法及其对细胞增殖和药物渗透性的影响。 类器官（Organoid）的培养体系： 探讨了从干细胞或原代组织中诱导构建具有组织特异性结构和功能的类器官，包括关键信号通路（如Wnt, Notch, TGF-$eta$）的调控策略。 第三部分：应用领域与质量控制 第六章：细胞培养在药物筛选与毒理学中的应用 本章将细胞培养技术置于生物制药研发的核心地位。 高通量筛选（HTS）的细胞模型： 讨论了如何将自动化液体处理系统与3D培养体系结合，以提高药物筛选的通量和体内相关性。 体外药代动力学/药效学（PK/PD）模型： 介绍了利用多层细胞系统（如细胞屏障模型）模拟血脑屏障或肠道吸收过程的方法。 细胞活力与细胞毒性评估： 扩展了基础的MTT测试，深入介绍了流式细胞术在细胞周期分析、凋亡通路检测中的应用，以及使用高内涵成像系统（HCS）进行多参数定量分析。 第七章：细胞功能分析与分子互作研究 本章侧重于利用培养细胞作为工具研究特定的生物学过程。 信号转导通路分析： 详细介绍了刺激细胞后进行Western Blotting、免疫荧光染色（IF）和ELISA等技术来监测特定蛋白的磷酸化水平和蛋白间相互作用的方法。 基因功能研究： 阐述了利用siRNA/shRNA进行基因沉默和使用CRISPR/Cas9系统进行基因编辑后，在培养系统中观察表型变化和功能恢复的实验设计。 细胞因子与趋化因子的定量分析： 介绍了ELISA和Luminex技术在检测培养上清液中分泌因子表达谱方面的精确应用。 第八章：质量保证、伦理规范与未来趋势 本章对细胞培养领域的规范化和前瞻性进行了总结。 交叉污染的检测与消除： 强调了支原体污染（Mycoplasma contamination）的隐蔽性及其对实验结果的严重影响，并提供了常规的检测方法（PCR、Hoechst染色）和清除方案。 GLP/GMP环境下的细胞培养要求： 探讨了在临床级细胞治疗产品生产中对环境、人员和过程控制的严格要求。 新兴技术展望： 展望了类器官芯片（Organ-on-a-chip）技术、人工智能在培养条件优化中的作用，以及单细胞测序技术在分析异质性细胞群中的潜力。 本书结构严谨，图文并茂，配备了大量实验流程图和技术细节解析，确保读者能够从理论到实践，扎实掌握现代细胞培养技术的全貌。

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