Basic Methods in Protein Purification and Analysis pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:Cold Spring Harbor Laboratory Press

作者:Richard J. Simpson

出品人:

页数:436

译者:

出版时间:2008-11-01

价格:USD 95.00

装帧:Paperback

isbn号码:9780879698676

丛书系列:

图书标签:

• 蛋白质纯化
• 蛋白质分析
• 生物化学
• 分子生物学
• 实验技术
• 蛋白质组学
• 生物技术
• 实验室操作
• 蛋白质化学
• 研究方法

《分子生物学实验指南：从基因克隆到蛋白质表达》 本书是一本面向生物学、生物化学及相关领域研究人员的综合性实验手册，旨在系统性地介绍和梳理分子生物学研究中的核心技术与基本操作。本书内容聚焦于从基因的获取与操作，到蛋白质的体外表达与初步鉴定，为读者提供一套完整而实用的实验流程。 第一部分：基因的获取与操作 本部分将详细阐述获取和操纵目标基因的各种常用方法。 核酸提取与纯化： 读者将学习如何从不同来源（如细菌、酵母、植物组织、动物细胞等）高效提取DNA和RNA，并掌握多种纯化技术，以获得高质量的核酸模板，为后续实验奠定基础。内容将涵盖磁珠法、离心柱法等，并讨论不同方法的优缺点及适用场景。 PCR技术详解： 本章将深入介绍聚合酶链式反应（PCR）的原理、关键要素（如引物设计、模板选择、PCR反应条件优化、不同类型的PCR技术如RT-PCR、qPCR等）。通过具体的实验案例，指导读者如何高效扩增目标基因片段，并解决常见的PCR问题。 基因克隆策略： 读者将学习如何将PCR扩增得到的基因片段高效地插入到载体中。内容将详细介绍限制性内切酶消化-连接策略、TA克隆、Gibson组装等多种克隆技术，并讨论不同方法的效率、适用范围及注意事项。同时，还将涉及载体类型（如质粒、噬菌体等）的选择及其功能。 感受态细胞的制备与转化： 为了将重组质粒导入宿主细胞，需要制备化学法或电击法感受态细胞。本章将提供详细的制备流程和关键操作技巧，并介绍将重组质粒导入大肠杆菌、酵母等宿主细胞的转化方法，以及转化效率的评估。 菌落筛选与鉴定： 成功转化后，需要从大量转化子中筛选出含有正确重组质粒的菌落。内容将涵盖蓝白斑筛选法、抗生素筛选法等，并介绍通过菌落PCR、酶切鉴定等方法快速验证克隆的正确性。 第二部分：蛋白质的体外表达与初步鉴定 本部分将聚焦于在体外系统中高效表达目标蛋白，并进行初步的定性和定量分析。 原核表达系统： 大肠杆菌是常用的原核表达宿主。本章将详细介绍选择合适的表达载体（如pET系列）、优化诱导表达条件（如诱导剂浓度、诱导时间、温度等），以获得高水平的目标蛋白表达。同时，还将讨论蛋白融合标签（如GST、His-tag）的应用及其对表达和纯化的影响。 真核表达系统（酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞）： 对于需要进行翻译后修饰或折叠正确的蛋白质，真核表达系统是更好的选择。本章将分别介绍酵母、昆虫细胞（杆状病毒系统）和哺乳动物细胞（瞬时转染、稳定细胞系构建）的表达特点、优势和劣势。读者将学习如何根据蛋白特性选择合适的真核表达系统，并掌握相应的表达优化策略。 细胞裂解与初步蛋白提取： 成功表达后，需要将细胞裂解以释放胞内蛋白。本章将介绍不同类型细胞的裂解方法（如超声波裂解、酶解、化学裂解等），以及如何根据蛋白的溶解性选择合适的裂解缓冲液和添加剂，以最大程度地获得目标蛋白。 SDS-PAGE电泳分析： SDS-PAGE是分析蛋白质分子量和纯度的基本技术。本章将详细介绍SDS-PAGE的原理、实验步骤、凝胶配制、上样技巧、电泳缓冲液的选择以及染色方法（如Coomassie Blue、银染）。读者将学会如何通过SDS-PAGE评估目标蛋白的表达水平、分子量是否正确，以及初步的纯度。 Western Blotting（印迹法）： Western Blotting是检测特定蛋白质存在和相对含量的金标准技术。本章将深入介绍Western Blotting的原理，包括样本处理、SDS-PAGE、转膜（PVDF膜、NC膜）、封闭、一抗和二抗孵育、显色检测等关键步骤。同时，将指导读者如何设计实验、选择合适的抗体，以及如何解读实验结果。 蛋白质定量方法： 为了准确评估蛋白质的浓度，需要进行定量分析。本章将介绍几种常用的蛋白质定量方法，如Bradford法、BCA法等，并讨论它们各自的原理、优缺点、适用范围以及操作注意事项。 第三部分：质量控制与实验设计 本部分将强调实验的严谨性和可重复性，为读者提供质量控制和实验设计的指导。 常用缓冲液的配制与pH调节： 详细介绍各类常用缓冲液（如Tris-HCl、HEPES、PBS等）的配制方法、pH调节技巧，以及其在不同实验中的应用。 无菌操作技术： 强调在分子生物学和蛋白质实验中无菌操作的重要性，介绍超净工作台的使用、试剂的灭菌方法、常用培养基的配制等。 实验设计原则： 引导读者进行合理的实验设计，包括设置对照组、重复实验、样本量选择等，以确保实验结果的可靠性和可重复性。 数据记录与分析： 强调详细、规范的实验记录对于后续数据分析和论文撰写的重要性，并介绍基本的统计学分析方法。 本书力求语言通俗易懂，实验步骤清晰明确，辅以图示和表格，旨在帮助初学者快速掌握分子生物学实验的基本技能，并为有经验的研究人员提供有用的参考。通过对本书的学习和实践，读者将能够独立完成从基因克隆到蛋白质表达与初步鉴定的关键实验环节，为更深入的蛋白质功能研究打下坚实的基础。

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这本书的封面设计得非常简洁，但色彩搭配却很吸引人，黑色的背景映衬着分子结构的几何线条，给人一种专业而又充满深度的感觉。我第一次翻开它时，就被它清晰的章节划分和严谨的逻辑结构所吸引。作者显然花了很多心思来组织这些内容，从最基础的理论铺陈到复杂的实验流程，每一步都衔接得天衣无缝。尤其是那些关于层析技术的部分，图文并茂的解释方式，让我这个初学者也能迅速把握核心概念。书中对不同类型层析介质的特性及其适用范围的论述极为详尽，这不是那种泛泛而谈的入门手册，而是真正深入到了“为什么”和“如何做”的层面。读完对纯化方法的介绍后，我感觉自己对蛋白分离的整个过程都有了一个全新的、系统性的认识，不再是零散知识点的堆砌，而是一条清晰的、可操作的路线图。这种结构上的严谨性，对于需要快速掌握实验技能的读者来说，无疑是一大福音。

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这本书的文字风格可以说是教科书中的一股清流，它既保持了学术著作应有的严谨性，又避免了过度晦涩难懂的术语堆砌。作者似乎很擅长用清晰、有力的句子来阐述复杂的过程。在解释酶动力学在纯化过程中的应用时，那些原本让人望而生畏的数学模型，被拆解成了几个易于理解的逻辑步骤，配以精妙的图表说明，使得抽象的理论变得触手可及。更让我惊喜的是，它没有停留在对传统技术的罗列上，还穿插了一些关于高分辨率技术和自动化设备的介绍。这种前瞻性的视角，让这本书的价值不仅仅局限于眼前的实验，更像是一张通往未来生物分析领域的导航图。它鼓励读者跳出固有的思维框架，去思考如何利用最新的技术来优化现有的纯化策略。

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如果说有什么地方可以稍微改进的话，那就是书中对某些新型纯化介质的讨论稍显保守。当然，考虑到这本书的出版时间，这或许情有可原，但对于那些热衷于探索前沿技术的读者而言，可能会觉得略有遗憾。不过，瑕不掩瑜，这本书真正的价值在于它构建了一个极其稳固的理论基础。它教给我们的，不仅仅是操作SOP，更是解决问题的思维模式。例如，在介绍疏水层析（HIC）时，它深入分析了盐浓度梯度对蛋白选择性的影响，并对比了不同盐类（硫酸铵、磷酸钾等）的“盐析效应”差异。这种对底层原理的深挖，使得当我们在实际操作中遇到蛋白沉淀或回收率低的问题时，能迅速回溯到缓冲液体系的调整上，而不是盲目地更换设备或试剂。

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我特别欣赏这本书在实验操作细节上的那种“较真”劲儿。很多教科书为了追求篇幅简洁，往往会忽略一些关键的、容易出错的微小步骤，但这本书却把这些“陷阱”都标注了出来。比如，在讨论电泳分析时，它不仅介绍了SDS-PAGE的基本原理，还花了大篇幅去解析不同浓度的聚丙烯酰胺凝胶对不同分子量蛋白分离效果的影响，甚至连缓冲液的pH值对蛋白质迁移速率的微小扰动都进行了探讨。读到这些内容时，我仿佛能闻到实验室里淡淡的化学试剂味，感受到操作台上的忙碌与专注。它不是在告诉你“这样做”，而是在告诉你“为什么必须这样做”，这种对科学精神的强调，让我对实验的尊重感油然而生。这种对细节的执着，正是区分一本优秀参考书和一本平庸教材的关键所在。

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总而言之，这是一本值得摆在任何分子生物学或生物化学实验室工作台上的案头书。它的价值在于其深度、广度与实用性的完美平衡。我个人最喜欢它在“质量控制”部分的处理方式。它没有将分析检测视为纯化结束后的附加步骤，而是将其融入到整个流程的反馈机制中。从初步粗提的凝胶过滤到最终产品纯度的HPLC验证，每一步的分析指标都被清晰地界定和要求。这种对“终点决定过程”的强调，极大地提升了实验的成功率和可重复性。对于任何希望将蛋白纯化从一门“艺术”转变为一门可靠的“工程学”的科研人员来说，这本书提供了一套无可替代的方法论。

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