Cytochrome P450 Protocols (Methods in Molecular Biology) pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

简体网页||繁体网页

☆☆☆☆☆

出版者:Humana Press

作者:

出品人:

页数:0

译者:

出版时间:1998-07-30

价格:USD 115.00

装帧:Hardcover

isbn号码:9780896035195

丛书系列:

图书标签:

• Cytochrome P450
• Drug Metabolism
• Enzyme Assays
• Molecular Biology
• Protocols
• Biochemistry
• Pharmacology
• Toxicology
• Liver Microsomes
• Protein Expression

《细胞色素P450：分子生物学实验方法》 引言 细胞色素P450（Cytochrome P450，简称CYP）是一类含血红素的单加氧酶，在生命体内扮演着至关重要的角色。它们是参与生物转化（biotransformation）的关键酶系，广泛存在于细菌、真菌、植物和动物中，尤其在哺乳动物肝脏中含量丰富。CYP酶系能够催化多种底物的氧化反应，包括外源性物质（如药物、污染物、毒素）和内源性物质（如类固醇激素、脂肪酸、胆固醇）。这种广泛的底物特异性和代谢能力使得CYP酶系在药物代谢、解毒、激素合成与调控、脂肪酸代谢等多种生理和病理过程中发挥着核心作用。 本书内容概述 《细胞色素P450：分子生物学实验方法》是一本全面而深入的实验指南，旨在为研究细胞色素P450酶系提供一套系统、实用且先进的分子生物学实验技术和策略。本书汇集了该领域顶尖科学家的宝贵经验，涵盖了从基因克隆、蛋白表达、活性测定到功能研究等多个层面。本书的出版，旨在为科研人员提供一套可靠的工具箱，助力其在CYP领域取得突破性进展。 核心实验技术与方法 本书的重点在于提供详细、可操作性强的实验方案，帮助研究人员克服在CYP研究中可能遇到的技术挑战。内容涵盖以下几个主要方面： CYP基因的克隆与鉴定： 引物设计与PCR扩增： 介绍如何根据已知的CYP基因序列设计高效的PCR引物，以特异性地扩增目标CYP基因。详细说明不同PCR试剂盒和反应条件的优化策略，包括模板DNA的提取、PCR循环参数的调整以及产物的鉴定方法（如琼脂糖凝胶电泳）。 基因克隆策略： 深入探讨多种常用的基因克隆方法，包括限制性内切酶/连接酶法、TA克隆、Gibson组装等，并针对CYP基因的特性（如GC含量、是否存在重复序列）提出优化建议。详细介绍载体选择、连接反应的优化以及转化和筛选阳性克隆的步骤。 基因序列分析： 涵盖基因序列的测定（Sanger测序、高通量测序）、序列比对（BLAST）、同源性分析以及功能区域（如血红素结合位点、底物结合口袋）的预测与鉴定。 CYP蛋白的表达与纯化： 原核表达系统： 详细介绍在大肠杆菌中表达CYP蛋白的策略，包括选择合适的表达载体（如T7启动子、His-tag融合表达）、优化诱导条件（如IPTG浓度、诱导温度）、表达产物的胞内定位（如包涵体或可溶性蛋白）及其优化方法。 真核表达系统： 阐述在哺乳动物细胞（如HEK293T、CHO细胞）或酵母细胞中表达CYP蛋白的技术。介绍瞬时转染和稳定细胞株的建立，以及不同表达载体的选择（如CMV、SV40启动子），并着重介绍如何实现CYP蛋白的正确折叠和翻译后修饰。 标签融合与蛋白纯化： 详细介绍常用的蛋白标签（如His-tag, GST-tag, MBP-tag）在CYP蛋白表达中的应用，以及基于这些标签的亲和层析纯化策略。涵盖常用的层析介质（如Ni-NTA、谷胱甘肽、琼脂糖珠）、洗脱条件优化、缓冲液配制以及纯化过程中的蛋白稳定性维持。 共表达体系： 针对CYP酶系通常需要辅助蛋白（如细胞色素b5，NADPH-细胞色素P450还原酶）参与活性，本书将详细介绍如何构建能够共表达CYP蛋白及其辅助因子的系统，以获得具有生理活性的CYP酶。 CYP酶活性的测定与分析： 底物特异性测定： 介绍如何利用荧光底物（如MUP、MPF）或高效液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）技术，定量测定CYP对特定底物的代谢活性。详细说明不同检测方法的原理、仪器设置、样品前处理和数据分析。 底物动力学研究： 讲解如何通过改变底物浓度，测定CYP的米氏常数（Km）、最大反应速率（Vmax）和催化效率（kcat/Km）。介绍Eadie-Hofstee图、Lineweaver-Burk图等动力学分析方法，以及如何利用统计学软件进行数据拟合和分析。 抑制剂与诱导剂筛选： 提供系统的方法来评估化合物对CYP活性的抑制作用（IC50值）或诱导作用。介绍高通量筛选（HTS）策略，以及如何设计实验以区分竞争性、非竞争性或不可逆抑制。 放射性底物或同位素标记底物测定： 针对某些难以检测的底物，介绍使用放射性标记的底物或同位素标记的底物进行代谢产物分析的方法，以及相应的检测技术。 CYP的功能与相互作用研究： 体外与体内研究： 详细阐述在重组表达蛋白、细胞裂解液、全细胞、肝微粒体、肝细胞以及在体内的动物模型中研究CYP功能的方法。 药物-药物相互作用（DDI）研究： 介绍如何利用CYP基因工程细胞株或人肝微粒体，预测和评估药物之间的相互作用，区分CYP酶介导的相互作用类型。 CYP的基因调控研究： 涵盖分析CYP基因转录调控元件（如启动子、增强子）的功能，以及研究转录因子（如PXR、AhR、CAR）对CYP表达调控的实验技术。 CYP蛋白结构与功能关系研究： 介绍利用定点诱变、蛋白质晶体学、冷冻电镜等技术，探索CYP蛋白的活性位点、底物结合模式以及突变对酶活性的影响。 CYP在疾病中的作用研究： 提供研究CYP基因多态性、表达异常与疾病发生发展之间关系的技术，以及如何利用基因敲除或基因过表达动物模型来揭示CYP在生理病理过程中的具体作用。 本书的特色与价值 全面性： 涵盖了CYP研究的各个关键环节，为研究人员提供一站式的解决方案。 实用性： 实验方案详细、步骤清晰，并附有优化建议和注意事项，易于操作和复现。 前沿性： 引入了最新的分子生物学技术和分析方法，反映了CYP研究的最新进展。 指导性： 汇集了领域内专家的实践经验，帮助研究人员避免常见的实验陷阱，提高研究效率。 跨学科性： 本书内容对于药理学、毒理学、生物化学、分子生物学、代谢组学等多个学科的研究人员都具有重要的参考价值。 结论 《细胞色素P450：分子生物学实验方法》是一本不可或缺的实验工具书，它将为细胞色素P450领域的研究者提供强有力的支持，帮助他们深入理解这些关键酶的功能、调控及其在生命科学和医学中的重要作用。通过掌握本书所提供的先进实验技术，研究人员将能够更有效地解析CYP酶系的分子机制，推动药物开发、疾病诊断和治疗策略的进步。

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

这本书简直是分子生物学研究者的救星！我刚开始接触细胞色素P450酶学领域时，感觉就像是进入了一个迷宫，各种实验技术和理论知识让人头晕目眩。这本手册简直就是我手持的地图，它没有用那些晦涩难懂的教科书语言来吓唬人，而是用一种非常务实、手把手教学的方式，将复杂的实验步骤拆解得清清楚楚。从酶的提取、纯化到活性测定，每一个环节的细节都考虑到了，甚至连一些“小窍门”——比如如何避免蛋白降解，或者如何优化底物检测的灵敏度——都有详细的描述。我特别欣赏它的“故障排除”部分，当你按照标准流程走却发现实验结果一团糟时，翻开那几页，总能找到让你茅塞顿开的提示。对于初学者来说，这本指南的价值远超那些厚重的理论著作，因为它直接关系到你能否在实验室里真正“做出”数据。我记得有一次我尝试做一个微粒体结合实验，怎么都跑不出清晰的带子，后来对照书上的图谱和注意事项，才发现是缓冲液的pH值出了问题。这种即时解决问题的能力，是其他泛泛而谈的参考书无法比拟的。

评分☆☆☆☆☆

从整体来看，这本书已经超越了“协议手册”的范畴，它更像是一部微型的、高度聚焦的细胞色素P450系统研究的“百科全书”。我惊喜地发现，其中关于药物相互作用（DDI）预测模型的建立和验证方法也被纳入其中，这对于药物研发领域的同仁来说，是巨大的福音。它没有回避当前研究的前沿和难点，反而主动提供了解决这些难题的潜在实验路径。虽然有些章节涉及的理论深度较高，初学者可能需要配合其他文献来理解，但这本书的强大之处就在于它提供了一个坚实的实验基石，让你可以在这个基石上向上搭建复杂的理论结构。它促使我重新审视过去的一些实验设计，并发现了许多可以改进和提升效率的地方。对于任何想要在P450领域做出有影响力研究的人来说，这本书与其说是一本工具书，不如说是一种思维方式的引导，它教会你如何以最系统、最规范的方式来处理这类复杂的膜酶系统。

评分☆☆☆☆☆

这本书的组织结构体现了一种极高的专业素养和对读者需求的深刻理解。它的章节划分逻辑清晰，完全是按照一个完整的实验流程来设计的：从样品制备的质量控制，到不同底物反应的动力学测定，再到涉及基因表达和重组蛋白系统的部分，层层递进，毫不含糊。我发现自己经常在不同章节之间跳转，但每次都能迅速定位到需要的信息，这得益于它详尽的索引和条理分明的目录设计。特别是关于体外代谢稳定性的评估部分，它详细介绍了如何设置对照组、如何校正系统漂移，这些都是保证数据可靠性的关键步骤。我过去常常忽视这些看似微不足道的细节，导致重复性出现问题。这本书强有力地纠正了我的这种疏忽，它教会我，在P450研究中，细节决定成败。它更像是一本“实战手册”，而不是理论教材，这让我在处理复杂体系时，信心倍增。

评分☆☆☆☆☆

我必须承认，这本书的排版和图示质量给我留下了深刻的印象。在生物化学领域，有时候文字描述再精确，也不如一张高质量的流程图或电泳图谱能说明问题。这本手册在这方面做得非常出色。很多关键步骤，例如膜蛋白的去污剂选择和再构建步骤，都配有清晰的示意图，直观地展示了理论与实践的衔接点。此外，它对于试剂的规格要求也写得极其具体，这在很多通用的方法学书中是被忽略的。例如，它会明确指出某些底物或抑制剂需要特定的纯化等级，或者在特定条件下会发生降解，这些信息对于需要高精度测量的分析化学家来说至关重要。阅读过程中，我感受到作者团队在编撰时所付出的巨大努力，他们显然不是在“凑字数”，而是在竭力确保每一条建议都具有高度的可操作性和科学严谨性。这种对细节的执着，使得这本书在我的实验台上拥有了不可替代的地位。

评分☆☆☆☆☆

坦率地说，我购买这本书的初衷，主要是因为我手头上的某个特定P450亚型（具体是哪个就不说了，以免泄露太多细节）的活性分析遇到了瓶颈。市面上很多通用的分子生物学手册对这种高度专业化的酶系统往往只是蜻蜓点水。但《Cytochrome P450 Protocols》则展现出惊人的深度和广度。它不仅仅罗列了方法，更深入探讨了不同底物选择背后的生化原理和潜在的干扰因素。我尤其喜欢它对于各种分析方法的比较，例如HPLC、荧光法和化学发光法在定量特定代谢产物时的优缺点分析，写得非常客观和详尽。这让我可以根据自己的实验室条件和研究目标，选择最高效、最可靠的方案。它不是简单地告诉你“怎么做”，而是让你理解“为什么这么做”，这种对基础逻辑的阐述，极大地提升了我设计实验和解释结果的能力。对于资深研究人员来说，这本书更像是一个“标准操作程序的终极参考”，里面收录的很多精细的优化参数，都是需要花费数年时间在试错中积累的经验，现在被系统地整理在了一起，大大缩短了我们的摸索周期。

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆