Ribozymes and Sirna Protocols

Ribozymes and Sirna Protocols pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

出版者:Humana Pr Inc
作者:Sioud, Mouldy 编
出品人:
页数:640
译者:
出版时间:
价格:$ 152.55
装帧:HRD
isbn号码:9781588292261
丛书系列:
图书标签:
  • Ribozymes
  • siRNA
  • RNA interference
  • Molecular Biology
  • Protocols
  • Biotechnology
  • Gene silencing
  • Nucleic acid chemistry
  • Genetic engineering
  • Biochemistry
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具体描述

In this completely updated and expanded edition of a classic bench manual, hands-on experts take advantage of the latest advances in ribozyme, DNAzyme, and RNA interference technologies to describe in detail the exciting and successful methods now available for gene inactivation in vitro and in vivo. Their optimized techniques employ hairpain ribozymes, DNAzymes, hammerhead ribozymes and derivatives, group I intron ribozymes, Rnase P ribozymes, and siRNAs, as well as general methods for RNA structure analysis, delivery of oligonucleotides, and gene therapy. Also provided are novel methods for identifying accessible cellular mRNA sites; group I intron and RNAse P ribozymes protocols for effective design, selection, and therapeutic applications; and the latest RNAi methods for sequencing-specific gene silencing in a wide variety of organisms. Comprehensive and up-to-date, Ribozymes and siRNA Protocols synthesizes for experienced and novice investigators alike the exciting advances in understanding nucleic acid enzymes and demonstrates how they may be used to analyze gene function and target validation, and to productively develop new therapeutics for human diseases.

分子工具箱:从机制到应用,解锁核酶与siRNA的非凡潜力 在生命科学的浩瀚图景中,一些微小而强大的分子扮演着至关重要的角色,它们不仅是生命活动不可或缺的执行者,更是现代生物技术领域革新浪潮的核心驱动力。核酶(Ribozymes)和siRNA(small interfering RNA)便是其中最引人注目的两位“明星”。它们以其精妙的催化能力和精准的基因调控作用,为我们理解生命奥秘、开发创新疗法提供了前所未有的机遇。本书并非对现有文献的简单罗列,而是旨在为研究者和学习者构建一个全面、深入且极具实践指导意义的知识体系,从最基础的分子机制解析,到最前沿的应用探索,层层递进,为您打开通往核酶与siRNA研究世界的大门。 第一部分:核酶——超越蛋白质的催化之魅 长久以来,我们习惯于将酶的定义与蛋白质紧密联系在一起,认为只有蛋白质才能担负起催化生命化学反应的重任。然而,核酶的发现彻底颠覆了这一传统观念,揭示了RNA在生命活动中扮演的更为复杂且深刻的角色。它们证明了RNA不仅是遗传信息的传递者,更可以是具有催化活性的分子机器。 第一章:核酶的发现与进化史诗 我们将首先追溯核酶发现的辉煌历程,从早期的实验室偶遇,到后来对rRNA剪接、tRNA加工等内源性RNA催化机制的深入揭示。本章将重点探讨核酶在生命起源和进化中的潜在作用,以及它们如何从早期生命形式中演化而来,并与蛋白质协同进化,共同塑造了我们今天所见的生命蓝图。通过对不同类型核酶的比较分析,您将领略到生命在分子层面的智慧与创造力。 第二章:核酶的结构与催化机理精析 理解一种分子的功能,离不开对其精细结构的深入洞察。本章将聚焦于几种代表性核酶(如Tetrahymena大肠杆菌核酶、hammerhead核酶、hairpin核酶等)的结构特点,包括其三维折叠方式、关键活性位点以及与底物结合的模式。我们将详细阐述这些RNA分子是如何通过精确的空间构象和关键的核苷酸残基,实现对磷酸二酯键的水解或转酯反应。通过对计算模拟和实验证据的整合,您将能够清晰地理解核酶催化反应的分子基础。 第三章:天然核酶的多样性及其生物学功能 核酶并非孤立存在的催化单元,它们广泛参与到生命体内的各种关键生理过程中。本章将系统介绍几种重要的天然核酶及其生物学功能。例如,核糖体中的rRNA,作为最主要的催化核心,负责肽键的形成,是蛋白质合成的基石;其他如intron自剪接、tRNA的成熟加工等,都离不开核酶的精确调控。此外,我们还将探讨一些新兴发现的核酶,它们在基因表达调控、RNA代谢等方面发挥着不容忽视的作用。 第四章:人造核酶的设计与定向进化 基于对天然核酶的理解,科学家们已经迈出了设计和创造全新核酶的步伐。本章将介绍人造核酶的设计原理和策略,包括基于已知核酶结构的合理设计,以及利用定向进化技术筛选具有特定催化功能的RNA分子。我们将详细阐述定向进化实验的流程,包括RNA库的构建、筛选条件的设置以及对候选核酶的鉴定和优化。通过本章的学习,您将掌握如何根据实际需求,设计和构建具有特定催化能力的RNA分子。 第五章:核酶的生物技术应用前瞻 核酶的强大催化能力为生物技术领域带来了无限可能。本章将深入探讨核酶在生物技术领域的广泛应用。例如,在药物研发中,核酶可以作为抗病毒或抗癌的药物靶点;在基因工程中,它们可以用于精确切割DNA或RNA,实现基因的编辑和调控;在生物传感领域,核酶可以被设计成高度特异性的分子传感器,用于检测特定的核酸或小分子。我们将通过具体的案例分析,展示核酶在解决实际问题中的巨大潜力。 第二部分:siRNA——基因沉默的精准调控者 如果说核酶是生命中的“分子剪刀”,那么siRNA则是生命中的“分子审判官”,它们以一种前所未有的精确性,干预着基因表达的进程,为理解和调控基因功能提供了强大的工具。siRNA介导的RNA干扰(RNA interference, RNAi)现象,是现代分子生物学研究中最具革命性的发现之一,为基因功能研究和疾病治疗开辟了崭新的途径。 第六章:RNA干扰(RNAi)的基本原理与分子机制 本章将从宏观视角出发,详细介绍RNA干扰现象的发现及其在不同生物体中的普遍性。我们将深入剖析siRNA介导的RNAi通路,重点解析双链RNA(dsRNA)如何被Dicer酶切割成21-25个核苷酸大小的siRNA分子。随后,siRNA将与Argonaute(Ago)蛋白组装形成RNA诱导沉默复合物(RISC)。RISC复合物的形成是siRNA发挥功能的关键步骤。我们将重点阐述RISC如何识别靶标mRNA,以及后续的mRNA降解或翻译抑制机制。 第七章:siRNA的生物合成与内源性调控 除了外源引入的siRNA,生命体自身也能产生具有调控功能的内源性siRNA。本章将探讨生物体内的siRNA生物合成途径,包括一些非编码RNA(如miRNA)在siRNA生成中的作用。我们将深入研究内源性siRNA在基因表达调控、染色质重塑、基因组稳定性维持以及免疫防御等方面的作用。通过理解内源性siRNA的生成和功能,您将更全面地认识RNAi在生命活动中的重要性。 第八章:siRNA的设计、合成与递送挑战 siRNA作为一种强大的基因沉默工具,其设计和应用离不开精密的合成技术和高效的递送策略。本章将详细介绍siRNA的设计原则,包括序列选择、化学修饰以提高稳定性和降低免疫原性等。我们将探讨siRNA的化学合成方法,以及不同类型siRNA(如短siRNA、长siRNA)的特点。更重要的是,我们将深入分析siRNA在活体内的递送难题,包括其易被核酸酶降解、易被肾脏清除等问题,并介绍当前主流的递送载体(如脂质体、纳米颗粒、病毒载体等)及其优缺点。 第九章:siRNA在基础研究中的应用 siRNA的基因沉默能力使其成为研究基因功能的“金标准”工具。本章将系统阐述siRNA在基础生命科学研究中的广泛应用。通过特异性地沉默某个基因,我们可以揭示该基因在细胞增殖、分化、凋亡、信号转导等过程中的具体作用。我们将通过具体研究案例,展示siRNA如何帮助科学家们绘制基因功能网络、解析复杂的生物学通路,以及理解疾病的分子机制。 第十章:siRNA的临床转化与治疗应用 siRNA介导的RNAi技术已经从实验室走向临床,为众多疾病的治疗带来了新的希望。本章将重点聚焦于siRNA在临床治疗中的应用。我们将介绍siRNA疗法在治疗罕见病(如遗传性转甲状腺素淀粉样变性)、癌症、病毒性感染(如乙肝)、心血管疾病以及神经系统疾病等方面的最新进展。我们将探讨siRNA药物的开发策略、临床试验的设计以及面临的挑战和未来发展方向。通过对这些案例的深入分析,您将了解siRNA技术如何从基础研究转化为具有实际临床效益的治疗手段。 结论:融合与展望 核酶与siRNA,两种看似不同却又相互关联的RNA分子,共同构成了生命分子工具箱中不可或缺的两大组成部分。核酶以其催化活性,在物质转化和分子改造中发挥着作用;siRNA则以其调控能力,精准地影响着基因表达的“命运”。本书旨在通过对这两类分子的全面解析,帮助您深入理解它们的分子奥秘,掌握其研究方法,并激发您在生物技术和医学领域进行创新的灵感。 本书内容涵盖了从分子机制到应用实践的完整链条,力求以清晰的逻辑、详实的案例和前沿的视角,为您呈现一个生动而深刻的核酶与siRNA研究图景。我们相信,通过对本书的学习,您将能够更好地理解生命活动的精妙之处,并为利用这些强大的分子工具解决科学难题、改善人类健康贡献自己的力量。

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